摘要：建立以Real-time PCR为基础的新型高致病性A(H5N8)亚型禽流感病毒NA基因检测方法。针对2016年6月起频繁暴发的H5N8禽流感疫情,从GenBank和Global Initiative on Sharing All Influenza Data(GISAID)下载2014年以来的H5N8亚型禽流感病毒的NA序列,通过序列比对,在相对保守区域设计适用于实时荧光逆转录聚合酶链式反应(rRT-PCR)的引物和探针。选用28株不同NA亚型的流感病毒进行特异性验证,结果显示本文设计的引物探针组合能够特异性检测高致病性H5N8亚型禽流感病毒的NA基因。灵敏度检测结果显示,本文设计的引物探针组合能检出最低23个拷贝的RNA。本文建立了高致病性H5N8亚型禽流感病毒NA基因特异性荧光定量检测方法,与世界卫生组织(WHO)推荐的A型流感病毒M基因、H5基因检测引物探针的最低检测限一致,可以组合用于H5N8亚型禽流感病毒的检测。

摘要：建立以Sanger测序方法为基础的新型A(H5N6)亚型禽流感病毒全基因组扩增方法。从GenBank和Global Initiative on Sharing All Influenza Data(GISAID)下载近五年H5亚型流感病毒的HA基因序列,N6亚型流感病毒的NA基因序列,以及H5N1和H9N2亚型流感病毒内部6个基因序列,每个基因序列分别进行比对,在相对保守区域设计用于分段扩增的引物,共32对,选用3株病例分离病毒及6株环境分离病毒对引物进行验证。优化后的32对引物能够有效地扩增9株H5N6亚型禽流感病毒,其中3株病例分离病毒的扩增产物条带单一,无非特异扩增。6株环境标本分离病毒扩增产物中,个别反应有非特异扩增产物。建立了一种能够获得高致病性H5N6亚型禽流感病毒全基因组序列的Sanger测序方法,该方法简单、快速,为新型H5N6亚型禽流感病毒的进化分析提供了基础。

摘要：本研究构建了表达甲型流感病毒M2蛋白胞外区与铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)融合蛋白的原核表达载体,根据铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)核苷酸序列设计突变PCR引物并实施突变PCR,以获得PEA基因编码区第553位氨基酸密码子缺失的突变PEA(ntPE),从而产生无毒性的PEA突变基因,然后用合成的M2e编码区替换ntPE基因中的非必需区Ib,产生ntPE-M2e嵌合基因。将该嵌合基因导入pET表达载体以构建原核表达载体,将表达产物胶回收后与弗氏不完全佐剂联合皮下免疫BALB/c小鼠,终免两周后用5个LD50流感病毒A/PR/34/8株进行攻击。取动物血清作ELISA并取脾脏作ELISPOT试验结果表明,免疫组可以诱导小鼠产生抗M2e特异性抗体反应和细胞免疫反应并能够抑制病毒在肺内的复制。本研究为甲型流感病毒广谱疫苗的进一步研发打下了基础。

摘要：目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,***)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。

摘要：目的 建立针对H10N8禽流感病毒特异、灵敏的real time RT-PCR检测方法.方法 通过比对现有H10N8病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）全长基因序列,分别针对HA和NA基因设计引物和探针6套（P1-P6）和3套（P7-P9）,建立鉴别H10N8禽流感病毒real time RT-PCR方法,分别对筛选的引物进行特异性、灵敏性和临床标本检测适应性等评价.结果 特异性检测显示6套针对HA的引物和探针中的3套能够检测H10N8病毒,其中2套（P5和P6）与其他非H10亚型流感病毒无交叉反应;3套针对NA的引物和探针均能检测H10N8病毒,其中2套（P7和P9）与其他非N8亚型流感病毒无交叉反应.灵敏性检测显示,P5和P6以及P7和P9均能检出最大稀释度为109的H10N8病毒RNA,重复性显示4组的Ct值CV均＜3％.使用P6和P9对3例H10N8病例呼吸道标本份进行real time RT-PCR检测均为阳性,其中2例病毒分离阳性,4份病毒分离阳性的活禽相关环境样本检测均为阳性.结论 建立了H10N8禽流感病毒荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.

摘要：针对非固定保质期的生鲜品,研究了供应商-TPLSP-零售商三级冷链系统中当TPLSP同时承担生鲜品的保鲜与低碳责任时,冷链系统的保鲜、碳减排及定价等决策,对比分析了TPLSP碳减排技术引入及分散与集中决策模式下的系统决策和效益,分析了碳交易价格、消费者新鲜度与环境偏好等因素对冷链决策和效益的影响,设计了批发价格和两部收费相结合的契约激励机制。研究结果表明:碳交易价格的提高虽有助于提高生鲜品环境友好度,但也会降低生鲜品销量;同时改善经济和环境效益最有效的办法是鼓励TPLSP引入碳减排技术并引导消费者提高环境偏好,尤其对于新鲜度偏好较高的生鲜品;集中与分散决策下单位产品新鲜度与环境友好度不变,但分散决策会造成产品销量扭曲,损害冷链经济效益;当参数控制在合理范围内时,批发价格和两部收费契约可以实现该三级冷链系统的完美协调。

摘要：针对钢铁行业工艺设计复杂、工艺设计知识难于表达和工艺实例库庞大不易检索的问题,通过分析其工艺设计鲜明的阶段性和层次性特点,提出了基于分段分层实例推理的钢铁行业工艺设计策略。通过对工艺设计问题的逐段分解和逐层细化,降低了实例检索的空间,实现了不同阶段、不同层次的多实例重用。设计了基于实例检索网络模型的钢铁行业工艺实例检索程序,以及分段分层实例推理的工艺设计流程和工艺设计算法,并以实际应用加以验证说明。

摘要：为了在设计阶段降低钢铁产品的成本,将面向成本设计集成到已有的信息系统中,提出了基于全生命周期的钢铁产品集成化面向成本设计的概念,并建立了钢铁行业集成化面向成本设计模型。在设计过程中,以成本估算为核心对该模型进行阶段性估算,并向设计人员反馈产品成本信息,及时调整设计偏差,保证了设计出的产品既满足用户性能需求,又具有较好的经济性,在产品全生命周期范围内充分体现成本控制思想。给出了钢铁行业集成化面向成本设计模型的基本求解步骤,对钢铁产品设计中影响成本最大的合金原料配方设计环节建立了数学模型,并运用蚁群算法进行了优化。通过与经验数据的对比表明,优化结果不仅降低了合金原料使用成本,而且提高了产品的综合性能。

摘要：针对钢铁行业工艺过程复杂多变、导致工艺知识难于提取的问题,提出了基于钢铁产品特征分层设计、逐级求解的工艺知识发现策略,并在构建工艺数据集市的基础上,建立了基于粗糙集属性约简的钢铁行业工艺知识发现方法。以某钢铁集团企业两级工艺决策信息表为例进行实例验证,结果表明,所获得的工艺决策知识能够指导工艺决策者实践,并总结了该方法的优点。

摘要：针对面向订单生产的钢铁企业多品种小批量的市场需求与大批量的生产组织特点,分析了面向组批生产计划的钢铁产品质量设计的特点以及生产计划的集成性,提出了基于带空间和容量约束的聚类分析的组批质量设计方法。该方法引入了质量特性取值范围空间约束和设备容量约束,基于改进的微粒群算法对组批内不同品种合同质量特性差异的聚类分析,对组批质量特性综合值进行标准+α的优化设计。在满足设备容量要求的前提下尽可能减少质量的浪费,并且为组批生产计划的决策提供质量方面的量化依据,实现质量设计与生产计划之间的无缝集成。