摘要：目的以DNMT3a mRNA保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列(HK),并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p Gensil-1中,构建p Genesil-1-DNMT3a-shRNA、p Genesil-1-HK-shRNA重组质粒。方法应用转化技术将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中,通过卡那霉素抗性筛选出阳性菌落后提取质粒进行酶切和测序鉴定,应用质粒转染技术转染耐顺铂肺腺癌A549细胞(A549-DDP),利用RT-PCR技术检测转染重组质粒24、48、72 h后DNMT3a的沉默效率。结果测序结果与合成序列一致,重组质粒不能够被PstⅠ切开,转染p Genesil-1-DNMT3a-shRNA能够明显抑制DNMT3a的表达,抑制率分别达到25.5%,56.2%,63.4%,且呈明显时间依赖性,而p Genesil-1-HKshRNA无明显抑制作用。结论成功构建了DNMT3a基因shRNA及HK质粒真核表达载体,为进一步实验研究奠定了基础。

摘要：本文通过对新世纪我国旅游业及饭店业前景的调查、分析,针对专科教育中存在的利弊,指出了21世纪饭店管理专业学历制教育中关于教学计划,实践教学安排,师资队伍建设,校企联合办学等的设计方向及思路。