摘要：根据GenBank上登录的果胶酶基因保守序列设计引物,从本实验室已筛选的一株具有降解果胶质功能的枯草芽孢杆菌S-1中克隆到了pelB基因片段,pelB与pMD20-T载体连接后转化到大肠杆菌JM109中,测序并构建进化树分析。结果表明,其序列与来源于Bacillus sp.果胶裂解酶pel-15和pelA的同源性分别为40.98%和39.20%;与Bacillus pumilus的pelB一致性为40.32%。推断此pelB为类似果胶酶基因片段。

摘要：根据CYP98A3(GenBank登录号为AY064170)cDNA序列保守区设计引物,从正在分化的2年生‘欧美杨107’次生木质部提取的总RNA经RT-PCR扩增出一基因片段,然后与pMD20-T载体连接。重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为994bp,其中包含一个长为495bp的开放阅读框,编码的氨基酸序列(登录号为CAP47423)与NCBI中AY064170的CYP98A3编码氨基酸序列的相似性为91%,初步断定其为CYP98A3家族中的一员,其cNDA序列GenBank登录号为AM920690。参照国内外已发表的部分植物的c3h基因序列,构建了c3h的遗传进化树,分析了不同植物c3h的遗传进化关系。

摘要：据EMBL核酸序列库中发表的白杨杂种F5H的cDNA序列,利用Primer 5.0软件设计3组扩增引物。通过PCR及RT-PCR扩增反应,筛选出一组比较合适的引物,确定该引物对的最适反应体系和程序参数。利用该引物对,从正在分化的2年生欧美杨107茎的次生木质部提取的mRNA中RT-PCR扩增出一个867bp的木质素合成特异表达的f5h基因片段。将其克隆到pGM-T载体上,构建了f5h在大肠杆菌中的表达载体,并对引物筛选进行讨论。

摘要：由GenBank上发布的壳聚糖酶基因编码区序列设计PCR扩增引物,从笔者所在实验室已筛选的1株具有降解壳聚糖功能的芽孢杆菌中克隆得到壳聚糖酶基因片段,将该片段与pMD20-T载体连接后转化至大肠杆菌DH5α中,测序并与NCBI上已发布的芽孢杆菌属壳聚糖酶编码区序列进行比对分析。结果表明,该片段与来自糖苷水解酶46家族中的Bacillus circulans MH-K1和Bacillus ehimensis EAG1的壳聚糖酶编码区序列同源性分别为71.75%和75.93%;与糖苷水解酶8家族中的Bacillus ***.7-M的壳聚糖酶编码区序列同源性为87.73%。初步推断该片段为类似壳聚糖酶基因片段。

摘要：从大连渤海海域筛选出1株放线菌L1,结合形态观察、生理生化实验和16S rDNA分子鉴定,确定L1属于链霉菌属球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)。根据GenBank发布的非核糖体肽合成酶(NRPS)序列设计引物,从放线菌L1的基因组DNA中扩增获得NRPS基因片段。测序结果及比对分析表明该片段属于NRPS缩合结构域部分序列。三维建模显示其结构呈V型,包含缩合结构域核心序列,与数据库已知结构相一致,可以推断该克隆片段为NRPS缩合结构域基因片段,为后续深入研究缩合结构域特异性与相关NRPS功能提供基础。

摘要：为探索罗布麻酶法脱胶的最优工艺条件,采用筛选的新型罗布麻脱胶菌种——琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii FM208850),在单因素实验基础上,运用Box-Behnken设计的响应面试验方法对酶法脱胶工艺进行了预测。根据回归分析确定了最优工艺:添加质量分数0.2%Na2CO3使沤麻液初始pH值为9.5,酶量8.38 mL(161.3 U/mL),质量体积比1 g∶16 mL,脱胶温度45℃,脱胶时间10 h;此工艺下测得残胶率为7.937%。与回归模型预测残胶率相差不大,模型与实际情况拟合较好。

摘要：酰基载体蛋白属于载体蛋白大家族,其三级结构非常保守。在细胞新陈代谢过程中,酰基载体蛋白关联各种大的蛋白复合体酶系,能够将酰基链从一个酶中心位点转运到另一个酶的中心位点,同时可作为各种天然产物的酰基供体,与脂肪酸合成酶途径和聚酮合酶途径息息相关。研究酰基载体蛋白的结构和功能,为指导现有的合成途径和重新设计新的合成途径来合成天然或非天然产物提供依据和基础。

摘要：微生物许多非核糖体肽类次生代谢产物主要是由非核糖体肽合成酶(NRPS)催化合成。参考Gontang发布的非核糖体肽合成酶(NRPS)通用引物设计扩增NRPS腺苷酰化结构域基因序列的特异引物,从海洋链霉菌L1的基因组DNA中扩增获得一个715 bp的NRPS基因序列。测序结果及比对分析表明该片段属于NRPS腺苷酰化结构域部分序列。对其拟翻译的氨基酸序列组成成分、理化性质进行分析,显示其包含AFD class I超基因家族核心结合区,为NRPS腺苷酰化结构域(A结构域)所在区域。对氨基酸序列的二级结构预测和三级结构模拟,发现与数据库中肠菌素合酶F组分的结构相似。为后续研究A结构域的特异性及完整NRPS基因簇克隆提供了参考。

摘要：酰基辅酶A硫酯酶(acyl-CoA thioeaterase,ACOT)属于广泛的硫酯水解酶的一类酶,分属于α/β水解酶超家族和"HotDog"超家族。ACOT作用范围很广,可以裂解支链脂肪酸、短链和长链饱和及不饱和酰基辅酶A等多种含辅酶A的底物,在脂肪酸代谢途径中发挥信号转导、基因调控等生理生化作用。因此研究ACOT的结构和功能,可以为某些疾病治疗和发病机理研究提供依据,也可以为指导现有的代谢途径和重新设计新的合成途径来合成天然或非天然产物提供依据和基础。

摘要：根据Gen Bank发布的葡萄糖氧化酶基因序列设计PCR扩增引物,从筛选的1株可以产生葡萄糖氧化酶的菌株中克隆得到葡萄糖氧化酶基因片段,将该片段与p MD20-T载体连接后转化至大肠埃希菌DH5α中,测序并进行序列比对分析。结果表明,该克隆片段属于氧化还原酶超家族,且与同属氧化还原酶超家族中的Aspergillus niger strain BT18葡萄糖氧化酶相似度达到92%。从蛋白质预测的三级结构可以看出有FAD和NAG结合位点,说明该GOD片段理论上可以表达出GOD的主要功能。可以推断该克隆的基因片段为葡萄糖氧化酶基因片段。