摘要：目的:利用siRNA(small interference RNA)技术研究c-myc基因的对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对c-myc基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA。通过阳离子聚合物jet- SITM-ENDO将合成的siRNA转染入HeLa细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNA-scr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对HeLa细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化,RT-PCR法比较转染前后c-myc mRNA表达水平的变化。结果:细胞计数法结果显示,转染24 h后c-myc基因siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48 h后,抑制效率稳定。c-myc基因siRNA转染后能有效地抑制HeLa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,siRNA转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组。结论:体外转录合成的siRNA可有效降低HeLa细胞c-myc基因的表达,抑制细胞增殖。

摘要：目的:研究针对VEGF基因的siRNA(small interference RNA)对乳腺癌MCF-7细胞细胞周期的影响。方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对VEGF基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA。脂质体转染法将合成的siRNA转染入MCF-7细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNAscr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期变化,RT-PCR法比较转染前后p21、CyclinD1表达水平的变化,Westernblot检测转染前后磷酸化ERK的表达。结果:细胞计数法结果显示,转染24h后siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48h后,抑制效率稳定。siRNA转染后能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,S期细胞明显减少,G0/G1期细胞比例逐渐增多;p21mRNA表达显著上调,抑制Cyclin D1 mRNA及磷酸化ERK蛋白的表达。结论:体外转录合成的siRNA可能通过上调细胞周期蛋白激酶抑制剂p21的表达,下调Cyclin D1及磷酸化ERK的表达,将细胞周期阻滞于G0/G1期,从而显著抑制MCF-7细胞的增殖。

摘要：在生物化学课程的在线教学中,采用多种网络资源平台(如智慧树学习网、电话会议、微信、QQ等),建立学习社群,对教学内容和教学方案进行精心设计和组织实施,丰富学习社群的知识体系;然后结合在线直播和线上交互开展混合式教学。除了向学生传授生物化学基础知识之外,还与临床案例和生活实例等相结合,与学生进行多种形式的互动与讨论,发挥社群学习的优势,提高了在线学习的质量和效果。