摘要：研究基于SARS-CoV-2病毒N蛋白的抗菌肽设计及抗临床耐药菌机制。方法 在分析SARS-CoV-2病毒N蛋白的基因序列基础上,选择形成两亲性α-螺旋的序列进行设计合成。测定肽对临床耐药菌的抗菌活性和细胞毒性,并以此为基础,通过结构测定、细胞膜渗透实验、钙黄绿素荧光探针实验和原子力显微镜实验对肽的抗菌机制进行研究。结果 临床确诊患者发病后0~1周、1~2周、2~3周、3~13周的SARS-CoV IgG和N-IgG阳性率均逐渐升高(P<0.05)。临床疑似患者发病后0~1周、2~3周的SARS-CoV IgG和N-IgG阳性率均低于发病后1~2周、3~13周(P<0.05)。临床排除患者发病后0~1周SARS-CoV IgG和N-IgG阳性率均低于发病后1~2周、2~3周、3~13周(P<0.05)。结论 研究基于SARS-CoV-2病毒N蛋白的抗菌肽设计及抗临床耐药菌机制能够将有效依据提供给临床控制与治疗细菌感染。

摘要：目的研究人参皂苷Rg3联合肿瘤抑素19肽对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法实验为两因素两水平2×2析因设计,因素A为人参皂苷Rg3,水平为0 mg/L和40 mg/L,因素B为肿瘤抑素19肽,水平为0 mg/L和200 mg/L。CCK-8试剂盒检测肝癌HepG2细胞增殖情况;Hoechst33342染色检测细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡率。荧光探针JC-1检测细胞的膜电位改变。Western blot法检测细胞抑癌基因磷酸酶和张力蛋白同源蛋白(PTEN)、磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)蛋白的表达变化。天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)活性测定试剂盒检测细胞Caspase-3和Caspase-9的活性。结果人参皂苷Rg3、肿瘤抑素19肽及联合用药对HepG2细胞的增殖均有抑制作用,且两者具有正协同效应;CCK-8测定人参皂苷Rg3的IC50为45.06 mg/L,肿瘤抑素19肽IC50为214.03 mg/L。Hoechst33342染色可见Rg3和19肽单用或合用时均出现细胞凋亡,并且联合用药细胞凋亡形态变化明显。流式细胞术检测细胞凋亡趋势与Hoechst33342染色结果一致,联合用药凋亡率最高。荧光探针JC-1检测表明单用或合用时细胞膜电位下降,产生绿色荧光,联合用药产生绿色荧光最为明显。联合用药更为显著上调PTEN蛋白表达,下调p-PI3K和p-Akt蛋白表达,显著增高Caspase-3和Caspase-9活性(P<0.001)。结论人参皂苷Rg3和肿瘤抑素19肽具有抑制肝癌HepG2细胞增殖,诱导其凋亡的作用,且两者具有正协同效应。其作用机制可能是通过PTEN/PI3K/Akt信号通路实现的。

摘要：探索教育信息化环境下有效教学的新途径,改进教学方法和手段,在生物化学理论教学中应用微课,激发学生的学习兴趣,培养学生的自主学习能力,提高生物化学的教学质量。

摘要：为研究抗菌肽Cn-AMP2的结构与抗菌活性之间的关系,采用丙氨酸扫描法进行突变,设计一系列抗菌肽Cn-AMP2丙氨酸扫描突变体.应用生物信息学法研究突变体的理化性质参数,测定抗菌肽Cn-AMP2和突变体肽对8种革兰阴性菌和革兰阳性菌的抗菌活性,并以此为基础对抗菌肽Cn-AMP2的构效关系进行深入研究.结果表明,丙氨酸突变后,分子量和净电荷数量无明显变化,但疏水力矩有明显变化.Cn-AMP2和突变体肽抗革兰阴性菌最低抑菌浓度(MIC)为16~354μmol/L,抗革兰阳性菌最低抑菌浓度为26~250μmol/L.圆二色光谱测定表明,Cn-AMP2和突变体肽在222 nm处的摩尔椭圆率分别为-1362,-401 deg·cm^(2)·dmol^(-1).NPN荧光探针实验表明,Cn-AMP2和突变体肽对细菌细胞外膜破坏强度有明显差异.实验结果表明,第3位丝氨酸、第4位酪氨酸、第8位丝氨酸和第11位甲硫氨酸为关键位点.

摘要：目的以短链抗菌肽Cn-AMP1为基础拼接得到的抗菌肽C2和C4的抗菌活性和抗菌机制研究。方法应用生物信息学方法分析多肽的理化性质参数;使用圆二色光谱法测定其二级结构;使用CCK-8法测定其对BEAS-2B细胞毒性;通过抑菌实验和细菌细胞外膜实验,研究Cn-AMP1、C2、C4肽靶向细菌细胞膜的作用机制。结果圆二色光谱测定结果表明,在模拟膜环境中设计合成的C2和C4为α-螺旋结构;抗菌肽C2和C4相较于母肽Cn-AMP1具有良好的抗菌活性以及较低的细胞毒性;此外抗菌肽C2和C4与母肽Cn-AMP1相比都具有个更强的破坏细胞膜能力。结论C2和C4肽具有比Cn-AMP1肽更好的抗菌活性。