摘要：目的研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞（hBMSC）中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）3酶活性的影响及其抗凋亡作用。方法原代培养hBMSC。谷氨酸诱导hBMSC凋亡。设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰（siRNA）序列（Par-4-SiRNA-1、2），构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染hBMSC，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western印迹测定Smac蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶的活性。结果设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默，Par-4 mRNA水平分别被降低88％、67％，谷氨酸诱导hBMSC凋亡，凋亡百分率为（58．9±8．9）％。Par-4-SiRNA-1可显著拈抗谷氨酸的诱导凋亡作用，凋亡百分率降为（37．2±6．3）％（F=58．26，P〈0．01）。Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上凋（P〈0．01）和Caspase-3酶活性上调（P〈0．01）有显著的抑制作用（P〈0．01）。结论Par-4基因沉默能拈抗谷氨酸对hBMSC凋亡的诱导作用。其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关。

摘要：目的探讨小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代培养人骨髓间充质干细胞，谷氨酸诱导凋亡。设计和合成针对Par-4基因mRNA的siRNA（Par-4-siRNA），构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染人骨髓间充质干细胞，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR（real-timePCR）法检测Par-4mRNA的表达量。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western blot测定磷酸化（Thr308）的蛋白激酶Aktl蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶活性。结果筛选出的Par4-SiRNA-1、2显著抑制人骨髓间充质干细胞中Par-4基因的mRNA表达，mRNA水平分别降低88％、67％。在谷氨酸诱导后24h，人骨髓间充质干细胞发生凋亡，百分率为60．30％±6．82％。Par-4-SiRNA-1、2都显著抑制谷氨酸的诱导作用，凋亡百分率降为38．80％±3．97％（P〈0．01）和45．49％±4．32％（P〈0．01）。谷氨酸诱导后24h人骨髓间充质干细胞中磷酸化Aktl蛋白表达下调（89．074-6．42和28．30±5．65，P〈0．叭），而Par-4-SiRNA-1、2对之下调都有显著抑制作用（63．564-6．75和45．59±4．88，均有P〈0．01）。谷氨酸诱导后24h人骨髓间充质干细胞中Caspase-3酶活性上调（0．1428±0．0495和0．8616±0．1051，P〈0．01），而Par-4-SiRNA-1、2对之上调都有显著抑制作用（0．6581±0．0555和0．7041±0．0401，均有P〈0．01）。结论小RNA干扰可靶向抑制Par-4基因的表达，拮抗谷氨酸诱导的人骨髓间充质干细胞的凋亡。