摘要：为了建立猪衣原体（Chlamydia suis ）实时荧光定量 PCR（real-time PCR）检测方法，根据猪衣原体（*** ）的 MOMP 基因，选取高度特异保守的区域，设计实时荧光定量 PCR 引物和探针，并构建了重组质粒。结果显示，该方法建立的标准曲线方程为：Y＝-3．2147x＋41．218，线性相关系数为0．9991，扩增效率为104．6％，最低检测量为1．7＆#215;102 copies ！μL。该检测方法特异性较好，与鹦鹉热亲衣原体、流产亲衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、牛羊亲衣原体、鼠衣原体无交叉反应。批内和批间重复试验的变异系数在0．458％～1．174％范围内，具有较好的重复性；与普通 PCR 方法相比较，该方法具有较高的检出率。建立对猪衣原体的监测和流行病学调查都具有非常重要的意义。

摘要：为快速检测家畜嗜衣原体,选取家畜嗜衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因的高度保守区域,设计特异性引物和探针,通过对反应条件的优化,建立家畜嗜衣原体TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法的最低检测限为2.8×10copies/μL,在2.8×102~2.8×106 copies/μL范围内具有良好的线性关系,其标准曲线方程为y=-3.281 5x+41.396,线性相关系数r2=0.999 4,扩增效率为101.7%;该方法可特异性检测家畜嗜衣原体,对肺炎嗜衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热嗜衣原体、流产嗜衣原体等6种动物衣原体无交叉反应,特异性好;其批间重复试验和批内重复试验的变异系数分别为0.170 2%~0.467 2%、0.331 4%~2.796%,重复性良好。采用本试验建立的方法与OIE推荐的方法进行比较,二者的结果表现出良好的符合率。该方法的建立为家畜嗜衣原体的早期检测和流行病学调查提供了有效的检测手段。

摘要：为建立一种快速、准确检测流产嗜衣原体(***)Taq Man-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据***主要外膜蛋白基因的特异保守序列设计引物及探针,并优化反应条件,建立了检测***的荧光定量PCR方法。结果表明,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.6×103拷贝/μL^1.6×107拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数为0.9999。该方法仅对***的靶基因扩增呈阳性,而对鹦鹉热嗜衣原体、家畜嗜衣原体、鼠衣原体、沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体、猪源衣原体核酸扩增结果均为阴性,特异性强;其最低检出限为1.6拷贝/μL;组内和组间重复性试验变异系数均小于3%,具有良好的重复性。利用建立的方法和普通PCR方法同时对225份临床样品进行检测,结果显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高4.5%,表现较高的灵敏度和准确性。本研究建立的方法对***的临床鉴别检测和疾病诊断具有重要意义。

摘要：为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LSDV,而与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛痘病毒和猪痘病毒均无交叉反应;标准曲线在各浓度范围内呈现良好的线性关系,该方法建立的标准曲线方程为y=-3.141x+32.10,线性相关系数为0.999,扩增效率达到108%,最低检出下限为1.48 copies/L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%。采用此方法对52份模拟临床样品和112份临床样本的检测结果显示:32份模拟阳性样品检出LSDV核酸阳性,20份模拟阴性样品未检出LSDV;而用OIE推荐的普通PCR方法仅检出28份模拟阳性样品的LSDV核酸阳性,24份模拟样品的LSDV核酸阴性(其中20份为模拟阴性样品,4份为模拟阳性样品);两种方法均未从112份临床样品中检出LSDV核酸阳性。上述结果表明,荧光PCR的敏感性明显优于普通PCR,能够快速准确地检测LSDV,适用于临床样品的检测,为外来疫病防控提供了技术支撑。