摘要：【目的】克隆茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因CsRIP1和CsRIP2,探讨CsRIPs基因的组织表达特异性以及假眼小绿叶蝉和机械伤害处理对其表达的影响。【方法】Cs-Ev2(Gen Bank登录号:GH618807)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因的c DNA片段,利用RACE技术克隆该基因的全长c DNA,命名为CsRIP1(Gen Bank登录号:FJ648831)。利用RT-PCR技术从茶树子叶中分离出一个新的Ⅱ型核糖体失活蛋白基因的c DNA序列,命名为CsRIP2(Gen Bank登录号:GU951535)。利用PCR技术克隆CsRIPs的基因组序列。设计基因特异性引物,利用Real-time qRT-PCR技术检测CsRIPs的组织表达特异性,以及在叶片中假眼小绿叶蝉和机械伤害处理对其表达的影响。【结果】CsRIP1和CsRIP2的序列一致性为98%,都含有一个1 713 bp的开放阅读框,编码570个氨基酸残基,但是它们具有不同的3'非翻译区。CsRIP1和CsRIP2由信号肽序列、1个RIP结构域、链接肽和2个RBL结构域组成。CsRIPs与其他Ⅱ型RIPs具有较高的序列一致性,Ⅱ型RIPs保守的氨基酸残基,包括构成A链N-糖苷酶活性位点的氨基酸残基、B链中形成寡糖链结合位点的氨基酸残基、形成链间和链内二硫键的半胱氨酸残基以及RBL结构域中的Qx W基序,均出现在CsRIPs相应的位置上。系统进化树分析结果显示,同一物种的Ⅱ型RIPs首先聚类合并,2个CsRIP与樟的Ⅱ型RIPs聚为一支。比较CsRIPs的c DNA序列和基因组序列,发现它们的基因组序列不含内含子。CsRIPs基因的表达具有组织特异性,CsRIP1在叶片中的表达水平最高,在子叶中的表达水平最低,而CsRIP2在子叶中的表达水平最高,在叶片中的表达水平最低。在叶片中,CsRIP1和CsRIP2的表达均受假眼小绿叶蝉取食的强烈诱导,并且其表达水平随着取食时间的增加而逐渐增加,取食48 h后,它们的表达水平大约分别是对照的120和100倍。在叶片中,CsRIPs基因的表达也受机械伤害处理的诱导,CsRIP1的转录水平在处理后6 h达到最大值,CsRIP2在处理后6 h表达水平显著升高,12 h达到最大值。【结论】克隆茶树的2个Ⅱ型核糖体失活蛋白基因,它们可能参与茶树的防卫反应,且已发生亚功能化。进一步分析这2个基因的启动子,可以加深对CsRIPs基因转录调控以及RIPs的生物学功能的理解。

摘要：根据分子生物学学科特点,以茶树转录因子Cs CBF1的克隆及转录激活活性分析为基础,对分子生物学实验教学内容进行整合优化,构建了实验教学新体系,重点突出实验的综合性、系统性和设计性。采用研究型教学模式,提高了学生的实验兴趣,培养了学生的实验设计和创新能力,实现了学习实验技术和理论知识的统一。

摘要：目的：建立茶树仅-tubulin基因实时荧光定量RT-PCR方法。方法：根据GenBank中茶树d-tubulin基因保守区域设计-对特异性引物，将PCR扩增得到的a-tubulin基因克隆到pTGl9-T载体上，构建的重组质粒标准品经1／10梯度稀释后，用SYBRGreenI染料法绘制标准曲线，并进行融解曲线分析。结果：标准曲线Ct值检测范围为14．56-27．09，相关系数为0．991，溶解曲线分析显示产物为特异的单峰，其Tm值为81±0．3C。结论：建立了茶树***基因实时荧光定量RT-PCR法，为以oL-tubulin作为茶树内参基因进行功能基因表达差异研究奠定了基础。

摘要：茶树育种学是茶学专业的一门专业核心课程,种质资源是茶树育种的基础材料。茶树育种学的教学目标,不但是要求学生掌握课程的概念,更重要的是要实现有意义学习。围绕河南地方茶树种质资源的遗传多样性研究,设计出了引导性探究学习策略,有效地提高了学生学习的主动性和责任心以及操作技能,取得了较好的学习效果,实现了认知、能力和情感三个方面有意义学习。

摘要：SSR分子标记是一种基于DNA重复序列长度多态性的分子标记技术,是进行群体遗传学结构分析、构建遗传连锁图谱非常有力的工具。应用该技术的前提条件是要有相应的SSR引物,可利用CTAB法提取茶树基因组DNA,对茶树基因组DNA进行Mse I酶切连接获得目的基因,将目的基因进行PCR扩增后通过磁珠法洗脱,对产物进行测序,得到目的基因的序列组成。