摘要：为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、GUS报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融合识别位点loxFRT之间.将上述重组酶系统通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草,获得的再生植株分别通过GUS组织染色和PCR分析等方法进行鉴定.然后在37℃下热激处理转基因植株,利用GUS组织染色检测重组酶系统在转基因植株T1代幼苗中删除外源基因的效率,结果显示,该系统删除效率达到了48.2%～84.9%,说明通过重组酶系统pLFHFGN能够有效地删除转基因植物中的外源基因,这为解决转基因植物潜在的安全性问题提供了一条新的途径.

摘要：设计了一种依靠“Y”形接头延伸未知序列的方法 (YADE ,Y shapedAdaptorDependantExtension) ,成功地抑制了在未知序列扩增中的单引物扩增。用这种方法从棉花基因组中扩增了一个棉花胚珠cDNA片段F0 2 7的相邻序列———F0 2 7S和F0 2 7A。重叠分析表明 ,F0 2 7S与F0 2 7有 10 4bp的重叠 ,F0 2 7A与F0 2 7有 175bp的重叠。两个延伸片段分别含有 1和 3个可能的内含子 ,内含子均具有保守的边界序列GT -AG和与哺乳动物类似的分枝点序列。还对YADE法扩增未知序列的优缺点和可能的改进作了进一步讨论。

摘要：构建了球孢白僵菌不同诱导时间的混合cDNA文库。根据丝氨酸类蛋白酶的保守区域设计引物 ,以构建cDNA文库同样的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到长度为 5 94bp的片段BbP。序列测定表明BbP是球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶Pr1的一部分。以BbP为探针 ,从上述cDNA文库筛选得到长度为 15 5 7bp的克隆CDEP 1。CDEP 1含有一个 1134bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 377个氨基酸、分子量为 386 16、PI=8.30 2的蛋白酶前体。CEDP 1的核苷酸序列与蛋白酶K、金龟子绿僵菌Pr1、球孢白僵菌Pr1的同源性分别为 :5 7.9%、5 4 .7%、83.3%。根据cDNA序列扩增到CDEP 1的基因组序列 ,分析表明其中含有 3个内含子。Southern杂交表明CDEP 1在球孢白僵菌是单拷贝。

摘要：根据几种丝状真菌Hog1 MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从昆虫病原真菌球孢白僵菌中扩增出MAPK同源基因的部分片段,然后利用YADE法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK编码基因的全长序列,命名为BbHog1。序列分析表明,该基因编码358个氨基酸的多肽,推测分子量为40.99kDa,等电点为5.49。BbHog1含有MAPK保守的蛋白激酶激活域(TGY),序列与粗糙脉孢霉os-2(AF297032)、烟曲霉OSM1(XM_747571)、隐球酵母HOG1(AF243531)和酿酒酵母Hog1(Z73285)等Hog1 MAPK高度同源,相似性分别为94%、89%、83%和80%。系统聚类结果表明,BbHog1与酵母Hog1 MAPK同源。Southern杂交表明,BbHog1在球孢白僵菌基因组中以单拷贝形式存在。Northern分析表明,BbHog1在高渗、亚高温和营养胁迫等条件下的表达明显升高。由此推测,BbHog1基因可能与球孢白僵菌对逆境胁迫的适应性调节密切相关。

摘要：在YADE(Y shapedadaptordependentextension)方法的基础上 ,设计了一种新的cDNA末端快速扩增方法 ,称为Y RACE法 .利用该方法只需一次cDNA合成就能进行多个基因的 3′和 5′末端的扩增 .分别利用Y RACE方法和RACE试剂盒 (TaKaRa)扩增了一个棉花胚珠cDNA片段F0 2 7的末端序列 .序列比较表明 ,用Y RACE方法扩增的末端序列较试剂盒所得序列在最末端稍短 ,但同样能进行正确拼接并获得全长编码序列 .对Y RACE法的优缺点和可能的改进作了进一步讨论 .

摘要：根据几种丝状真菌FUS3/KSS1类MAPK的保守序列设计简并引物,从昆虫病原真菌球孢白僵菌中扩增出MAPK基因的部分片段,进而利用YADE法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK基因的全长序列,命名为BbMPK1。用3′RACE扩增出BbMPK1的全长cDNA序列,该序列含有一个1071bp的ORF,编码356个氨基酸的多肽,推测分子量为41.2kDa,等电点为6.61。BbMPK1含有11个MAPK共有的蛋白激酶区域和1个MAPK激酶作用的磷酸化位点区域(TEY),其氨基酸序列与丝状真菌的TMKA、PMK1、CMK1、FMK1和BMP1等MAPK高度同源。系统聚类结果表明,BbMPK1属于酵母FUS3/KSS1类MAPK。Southern杂交表明,BbMPK1在球孢白僵菌基因组中以单拷贝形式存在。RT-PCR分析表明BbMPK1在分生孢子休眠阶段、萌发阶段和菌丝生长时期均表达。研究结果为阐明酵母FUS3/KSS1类MAPK同源基因在球孢白僵菌中的作用奠定了基础。

摘要：在分析一株球孢白僵菌T DNA插入突变体T12的Tagging序列的基础上 ,根据与其具有高度同源性的一条金龟子绿僵菌EST序列 (编号为AJ2 732 2 6 )设计简并引物 ,用YADE法从球孢白僵菌中扩增出该EST的同源序列及其延伸序列。序列分析表明 ,该片段与粗糙脉孢霉的羧基转运蛋白JEN1具有高度同源性 ,由此确定该序列为球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1基因的部分序列。然后利用YADE法延伸扩增该序列的上、下游序列 ,获得球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的全长DNA序列 ,命名为GBbJEN1。利用 3′ RACE扩增出球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的cDNA序列 ,命名为BbJEN1。BbJEN1全长 16 5 6bp ,编码 5 14个氨基酸的蛋白。推测蛋白分子量为 5 5 975 .37Da,等电点 9.32。氨基酸序列与金龟子绿僵菌、粗糙脉孢霉和酿酒酵母羧基转运蛋白JEN1的同源性分别为 77%、6 6 %和30 %。序列分析表明 ,GBbJEN1含有 2个内含子。Southern杂交表明 ,GBbJEN1基因在球孢白僵菌基因组中为单拷贝。利用RT PCR法对BbJEN1的表达特性进行了分析 ,结果发现BbJEN1基因的转录受蟑螂壳、蝉蜕等昆虫体壁的诱导 ,受葡萄糖的抑制。进一步利用YADE法获得了长为 977bp的GBbJEN1上游序列 ,其中含有可能的葡萄糖抑制调控序列和压力反应元件。

摘要：苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(***)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据cry1A类基因序列设计特异引物,应用PCR技术从该菌株中扩增得到一大小约为3 6kb的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在ABIPRISM377自动测序仪上对其5′及3′端进行部分测序,结果表明其核苷酸序列与cry1A基因高度同源。

摘要：利用改进了的ＤＮＡ提取方法，从“三系”杂交水稻汕优６３的不育系、保持系、杂种一代和恢复系单株中提取ＤＮＡ，进行特异基因片断的ＰＣＲ基因扩增分析。结果表明：从２００个随机引物和设计的特定引物中筛选出３个引物，能有效地从不育系中鉴别出保持系，从汕优６３中分别鉴定出不育系、保持系、恢复系。研究结果表明，利用这些ＤＮＡ分子标记鉴定种子纯度，具有快速、准确、可靠的优点。

摘要：为进一步去除污水厂二级处理出水中的氮、磷和悬浮污染物,对比研究了一种新型生物膜-微絮凝滤池与高密度沉淀-纤维转盘过滤联用工艺(以下简称组合工艺)的深度处理性能。结果表明:新型生物膜-微絮凝过滤的出水TP质量浓度≤0.1 mg·L^(−1)、PO^(3−)_(4)-P质量浓度≤0.05 mg·L^(−1)、SS质量浓度≤10 mg·L^(−1)、TN质量浓度≤2 mg·L^(−1)、NO^(−)_(3)-N质量浓度≤0.5 mg·L^(−1);出水水质对受纳水体的环境影响小,综合污染指数仅为0.731,远小于组合工艺的2.734。此外,新型生物膜-微絮凝滤池避免了频繁的反冲洗,降低了反冲洗能耗,水处理成本仅为0.207元·m^(−3),比组合工艺低0.039元·m^(−3)。