摘要：目的建立快速筛查登革病毒(DENV)、乙型脑炎病毒(JEV)、寨卡病毒(ZIKV)、黄热病毒(YFV)以及基孔肯雅病毒(CHIKV)5种蚊媒病毒的重组酶介导等温扩增(RAA)方法。方法分析上述5种病毒的保守基因作为靶标区域并引入人核糖核酸酶P(RNaseP)基因作为内对照,设计6组特异性引物和探针,并根据引物二聚体和错配等生物信息学分析将6组引物和探针组合成3组双重荧光RT-RAA检测体系,在相同反应条件下进行检测。用5种病毒的体外转录RNA验证3组荧光RT-RAA检测体系的灵敏度,用疟原虫、汉坦病毒、汉城病毒以及流感病毒核酸验证方法的特异性;分别用中浓度(10^(4)拷贝/μl)、低浓度(10^(2)拷贝/μl)5种病毒的体外转录RNA验证3组双重荧光RT-RAA检测体系的重复性。结果通过生物信息学分析,将5种病毒和RNaseP组合为3组双重荧光RT-RAA检测体系,分别为DENV与ZIKV、JEV与YFV以及CHIKV与RNaseP,均在39℃反应15 min。3组双重荧光RT-RAA检测体系检测5种病毒体外转录RNA的灵敏度介于1~10^(2)拷贝/μl,其中检测DENV、ZIKV和YFV的灵敏度均为1拷贝/μl,JEV灵敏度为10拷贝/μl,CHIKV灵敏度为10^(2)拷贝/μl;3组荧光RT-RAA检测体系均与其他病毒无交叉反应。5种病毒的中浓度体外转录RNA的检出率均达到100.0%,低浓度体外转录RNA也能达到83.3%。结论本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于人体及蚊类样本中5种蚊媒病毒的筛查。

摘要：核酸杂交介导的荧光信号放大方法是指通过目标物触发或阻断核酸杂交反应,引起核酸杂交产物上标记的荧光信号分子数目发生变化,从而实现荧光信号放大的一类方法。该方法因具有设计灵活,特异性好,灵敏度高,响应时间短以及背景信号低等优点,现已广泛用于生物检测。作者介绍了该方法在细菌、核酸、蛋白质、生物小分子和无机金属离子检测中的研究近况,并对其存在的问题和发展趋势进行了阐述和展望。

摘要：目的 建立汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多不拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)4种引起肾综合征出血热病毒的快速筛查、诊断方法。方法 分析确定上述4种病毒的保守基因作为靶标区域,设计4组特异性引物和探针,组合成两组双重荧光重组酶介导等温扩增(RTRAA)反应体系。分别用4种病毒的体外转录RNA验证方法的灵敏度,采用登革病毒I-Ⅳ型、基孔肯雅病毒、黄热病毒疫苗株、乙型脑炎病毒、甲型流感病毒3型、甲型H1N1流感病毒以及乙型流感病毒核酸及4种病毒体外转录RNA进行特异性验证,分别采用中浓度(10^(4)拷贝/μl)、低浓度(10^(2)拷贝/μl)的体外转录RNA验证双检测体系的重复性。结果 通过生物信息学分析,将4种病毒组合成HTNV+SEOV组合以及PUUV+DOBV双重荧光RT-RAA检测体系,均在39℃检测15 min,检测灵敏度为1-10^(2)拷贝/μl,均与其他病毒无交叉反应。4种病毒对10^(4)拷贝/μl体外转录RNA检出率均达到100.0%,10^(2)拷贝/μl体外转录RNA检出率也能达到66.7%。结论 本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于人体及鼠类样本的诊断与筛查.

摘要：目的:建立胶体金免疫层析试纸条快速、定量检测尿样中克伦特罗的方法。方法:采用正交设计获得克伦特罗胶体金试纸条最佳工艺条件,建立T/C比值法定量检测尿样中克伦特罗残留。结果:胶体金免疫层析试纸条检测尿样中克伦特罗的最低检测限0.22ng/mL;当尿液中克伦特罗质量浓度在0.1～2.0ng/mL范围内,胶体金免疫层析试纸条具有较好的线性关系且50%抑制质量浓度(IC50)为0.36ng/mL;加标回收实验结果表明,阴性尿样分别添加0.5、1.0、1.5ng/mL克伦特罗,试纸条检测的平均回收率为(102.4±7.8)%、(96.5±6.8)%以及(103.3±7.2)%。结论:成功建立了基于胶体金免疫层析试纸条定量检测尿样中克伦特罗的方法。

摘要：为了建立一种基于不同靶基因的快速灵敏检测食品中产与不产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,本研究采用煮沸法提取基因组DNA,用普通PCR方法验证引物的特异性,通过在米饭中添加不同浓度的产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌模拟受污染的食品,采用本研究构建的荧光定量PCR方法对米饭进行检测。结果表明基于不同靶基因设计的两对引物具有特异性强和扩增效率高等优点,荧光定量PCR方法能对污染米饭中蜡样芽孢杆菌准确定量,检测限能达到101CFU/g。建立的荧光定量PCR方法特异、灵敏和准确,适用于食品中蜡样芽孢杆菌的快速定量检测。