摘要：目的探讨针对乙型肝炎病毒（HBV）S编码链的反基因锁核酸在转基因小鼠体内的抗病毒效果。方法将30只HBV转基因小鼠随机分为5组（力=6），分别为空白（5％葡萄糖＋脂质体）对照组、无关序列对照组、拉米夫定对照组、反义锁核酸对照组、反基因锁核酸组。拉米夫定组用灌胃法，锁核酸经尾静脉注入小鼠体内。采用实时荧光定量PCR检测血清HBVDNA；酶联免疫法检测血清HBV表面抗原（HBsAg）i逆转录PCR检测肝脏HBVSmRNA水平；免疫组织化学方法检测肝细胞HBsAg水平。组间比较用单因素方差分析。结果治疗后的3、5、7d，反基因锁核酸对HBVDNA抑制率分别为37．18％、50．27％、61．46％，HBsAg抑制率分别为30．17％、44．00％、57．76％，与给药前比较差异有统计学意义（p〈0．01）。HBVS基因mRNA的相对表达量为0．33、肝细胞HBsAg阳性细胞率为31％，与对照组比较，差异有统计学意义（p〈0．05）；肝肾生物化学指标检查和组织HE染色未发现异常改变。结论针对HBVS编码链设计的反基因锁核酸在转基因小鼠体内具有较好的抗病毒效果，为HBV的基因治疗提供理论依据和实验基础。

摘要：目的探讨针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S编码链的反基因锁核酸(anti-genelocked nucleic acid,Anti-G-LNA)在转基因小鼠体内的抗病毒效果.方法将30只HBV转基因小鼠随机分为5组(n=6),分别为空白对照组(Control)(5%GLU+脂质体)、无关序列对照组(USQ)、拉米夫定对照组(LAM)、反义锁核酸对照组(Anti-SLNA)、反基因锁核酸组(Anti-G-LNA).拉米夫定组用灌胃法;锁核酸经尾静脉注入小鼠体内.采用实时荧光定量PCR检测血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA);酶联免疫法检测血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg);逆转录PCR检测肝脏乙型肝炎病毒S基因mRNA(HBV S mRNA)水平;免疫组织化学检测肝细胞HBsAg水平.结果治疗后的第3、5、7天,反基因锁核酸对HBV DNA抑制率分别为37.18%、50.27%、61.46%,HBsAg抑制率分别为30.17%、44.00%、57.76%,与给药前比较有统计学意义(P<0.05),与各对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).HBV S基因mRNA的相对表达量为0.33、肝细胞HBsAg阳性细胞率为31%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);肝肾功能检查和组织HE染色未发现异常改变.结论针对HBV S编码链设计的反基因锁核酸在转基因小鼠体内具有较好的抗病毒效果,为HBV基因治疗提供理论依据和实验基础.

摘要：目的:探讨针对c-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸对肝癌细胞活力和凋亡的影响。方法:设计合成能特异性封闭c-myc基因第二外显子翻译起始区的反义寡核苷酸、硫代寡核苷酸和锁核酸,分别以阳离子脂质体介导转染HepG2细胞,采用RT-PCR检测细胞内c-Myc的mRNA表达变化;Western blot检测细胞内cMyc的蛋白表达变化;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;MTT法检测反义锁核酸的细胞毒性作用。结果:转染第5天后,反义锁核酸组c-Myc的mRNA相对表达量为0.335±0.016,明显低于对照组(P<0.05);c-Myc蛋白相对表达量为0.448±0.037,也明显低于对照组(P<0.01);凋亡细胞比例为32%±6%,显著高于对照组(P<0.05)。结论:针对c-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸能有效促进肝癌细胞的凋亡。

摘要：精准医疗是在科技浪潮的推进下提出的,它通过基因组测序、生物信息、大数据科学等多学科交叉应用,为患者提供更加准确和精细的个体化医疗服务[1]。精准医疗对病理学提出新的挑战,更是注入了生机,以形态学为基础的传统病理诊断技术远远不能满足精准医学的临床需求,传统的病理学技术与分子生物学、信息遗传学以及蛋白质组学等多学科相互交叉相互渗透形成了分子病理学,可以为临床提供精准的医学信息和证据。因而,分子病理诊断是在传统组织病理学的基础上结合分子生物学及分子遗传学的研究成果,并采用相关的分子生物学技术逐渐发展完善起来的交叉学科,该学科主要运用分子和遗传学方法对肿瘤进行分子病理诊断和分类,设计和验证能够反映预测疾病发生、治疗敏感性、病情发展等方面的生物标志物,为临床医生提供有价值的患者个体化资料,从而做到有针对性的个体化综合治疗。

摘要：目的探讨针对增殖相关基因(C-myc)第二外显子翻译起始区的反义锁核酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成能特异性封闭C-myc基因mRNA第二外显子翻译起始区的反义寡核苷酸、硫代寡核苷酸和锁核酸,分别以阳离子半乳糖配体介导转染Hep G2细胞,采用RT-PCR法检测细胞内C-myc的mRNA表达变化;Western blot法检测细胞内C-myc的蛋白表达变化;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;MTT法检测反义锁核酸的细胞毒性作用。结果转染第5 d后,反义锁核酸组C-myc mRNA相对表达量为(0.335±0.016),明显低于对照组(1.014±0.022),差异有统计学意义(P=0.015);C-myc蛋白相对表达量为(0.448±0.037),也明显低于对照组(1.00±0.00),差异有统计学意义(P=0.008);细胞凋亡比例为(32±6)%,显著高于对照组(0),差异有统计学意义(P=0.032)。结论针对C-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸能有效抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。

摘要：目的针对HBV C编码链设计合成反基因锁核酸(locked nucleic acid,LNA)片段,以HepG2.2.15细胞为研究对象,筛选并鉴定出能特异性阻断HBV复制和表达的有效治疗靶点药物。方法利用RNAstructure 5.0软件针对HBV C区编码链1914~1928 nt、1969~1983 nt、2002~2016 nt、2053~2067 nt、2069~2073 nt、2162~2176 nt和2404~2418 nt位点设计合成7条反基因LNA片段(分别以SQ1~SQ7表示),以阳离子脂质体lipofectamine 3000(lipo3000)介导转染HepG2.2.15细胞,隔3天对应给药,连续给药3次,分别于给药后第3、6、9天收集培养上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBeAg水平;实时荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)测定HBV-DNA浓度。结果针对HBV C区编码链2162~2176 nt(SQ6)和2404~2418 nt(SQ7)位点的反基因LNA片段对HBV-DNA复制和HBeAg表达的抑制效果最明显,用药后第3、6、9天,SQ6对HBeAg的平均抑制率分别为43.91%、59.95%和59.07%,HBV-DNA则分别为42.91%、50.09%和51.14%;SQ7对HBeAg的平均抑制率分别为44.18%、60.81%和60.02%,HBV-DNA则分别为47.28%、54.16%和52.22%。结论针对HBV C区编码链2162~2176 nt和2404~2418 nt位点的反基因LNA片段体外能有效抑制HBV的复制和表达,为抗HBV治疗提供一定的理论依据和实验依据。

摘要：临床生物化学和生物化学检验是医学检验专业的一门理论性和实践性都很强的重要专业学科。临床生物化学实验课是生物化学教学过程中的重要环节，它在培养学生的综合能力和提高综合素质上具有不可替代的作用。但是，传统的临床生化实验课教学内容是以验证性、简单性、重复性实验为主，主要为课堂传承知识服务，

摘要：目的针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前S1 dsDNA同聚嘌呤区设计反基因寡核苷酸药物-锁核酸(locked nucleic acid,LNA),并在体外观察抑制HBV复制的效果。方法针对HBV前S1 dsDNA的3023~3037 nt、3094~3109 nt两个同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计并合成LNA,以阳离子脂质体为载体,将药物转染入HepG2.2.15细胞内,采用荧光定量PCR技术和化学发光免疫技术分别检测3 d、6 d和9 d细胞培养上清液中HBV DNA和HBsAg的含量;CCK8法检测锁核酸对HepG2.2.15细胞代谢的影响。结果LNA对HepG2.2.15细胞的HBV DNA转录和HBsAg表达有显著的抑制作用,并且抑制效果随着时间进一步加强,在第9天的抑制率分别为45.37%和52.09%。两个同聚嘌呤组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而封闭3023~3037nt同聚嘌呤区的LNA抑制作用较强,且最适序列长度为15~25 bp。CCK8实验显示LNA对HepG2.2.15细胞无任何明显的代谢影响。结论针对前S1 dsDNA同聚嘌呤区的反基因锁核酸分子在体外能够有效地抑制HBV的复制,以封闭3023~3037 nt靶位效果较强,且合适序列长度为15~25 bp。

摘要：目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)preS1、preS2 DNA同聚嘌呤区设计的锁核酸在体外对HBV复制和表达的抑制作用。方法设计并合成锁核酸,以Lipo3000作为载体转染至锁核酸-脂质体组,设空白对照组,运用荧光定量PCR、化学发光免疫分析等技术观察锁核酸对HBsAg表达、HBV DNA复制的抑制作用,采用CCK8比色法观察锁核酸对HepG2.2.15细胞基本代谢的影响。结果加入锁核酸后,HBsAg、HBV DNA表达量相对于空白对照组逐渐降低,并随时间呈递增趋势,其中,preS1的3023-3037nt位点在第9天对HBsAg表达的抑制率达(61.94±4.11)%,对HBV DNA复制的抑制率达(56.08±3.22)%;preS2的3305-3320nt位点在第9天对HBsAg表达的抑制率达(72.93±4.14)%,对HBV-DNA复制的抑制率达(61.79±3.40)%。结论HBV preS1编码链的3023-3037nt位点和preS2编码链的3305-3320nt位点的反基因锁核酸片段对HBsAg表达和HBV-DNA复制的抑制效果最为明显,两者均可以作为抗HBV治疗的有效靶位。