摘要：人体寄生虫学是一门实用性较强的学科,其中实验教学是该课程的重要环节之一。目前实验教学中存在教学资源严重不足、教学时数减少、教学内容单一、学生学习兴趣不高等问题。广东医科大学基础医学院寄生虫学教研室通过合理规划线上线下教学资源,重新进行实验教学设计,引入更多的综合性实验,并适当融入思政元素,激发了学生学习热情,提高了实验教学质量,获得了学生的认可。

摘要：目的分离、克隆十二指肠钩虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂AduCPI1-AduCPI4基因,在大肠埃希菌中进行表达,了解重组AduCPI1-AduCPI4对组织蛋白酶(cathepsin,cat)的抑制作用。方法根据预测的4种编码AduCPI基因序列(GenBank No JQ762416-JQ762419)设计引物,采用PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增AduCPIs成熟蛋白编码基因,并克隆、连接到表达质粒pET32a-sumo,构建重组原核表达载体。重组载体转入到*** BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白。通过Ni-NTA亲和层析纯化破碎菌上清中的重组融合蛋白,在纯化柱上用SUMO蛋白酶酶切融合伴侣,收集穿透液获得纯化的重组目的蛋白,采用SDS-PAGE分析蛋白表达及纯化情况,采用酶活性抑制试验检测4种重组AduCPI对catB、catL和catS的抑制作用。结果扩增并克隆获得了4种AduCPI的成熟蛋白编码基因,构建的重组表达载体转化大肠埃希菌后表达相应蛋白,经纯化获得重组AduCPI1-AduCPI4。4种AduCPI抑制catS(0.5 nmol/L)(pH 6.5或7.4)的IC_(50)在(0.60±1.13)nmol/L~(2.89±1.37)nmol/L,抑制catL(0.5 nmol/L)(pH 5.5)的IC_(50)在(0.50±1.06)nmol/L~(1.42±1.07)nmol/L,抑制catB(0.5 nmol/L)(pH 6.0或7.4)的IC_(50)在(5.24±1.03)nmol/L~(68.90±1.38)nmol/L,其中以AduCPI4对3种组织蛋白酶的抑制作用最强,而AduCPI2对catS、catB(pH7.4)的IC_(50)分别为(0.80±1.08)nmol/L和(68.90±1.38)nmol/L,抑制作用效率差异较大,AduCPI2对catS具有较好的选择性抑制作用。结论克隆表达了4种AduCPI,该4种蛋白对组织蛋白酶L和S均具有很强的抑制作用,对组织蛋白酶B的抑制作用也较强,研究结果为进一步了解AduCPIs的生物学功能及其应用奠定了基础。

摘要：目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增出一条约310bp的目的片段,序列分析表明,其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97%,核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列,为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。

摘要：目的克隆家蝇幼虫Attacin抗菌肽基因,构建原核融合表达载体,建立Attacin体内抗菌活性检测系统,优化表达和纯化Attacin目的蛋白,并初步研究其抗菌生物学功能。方法以pUCm-T/Attacin重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Attacin编码区序列,分别克隆至原核表达载体pET30a(+)和pGEX-4T-1,构建原核重组质粒,转化大肠埃希菌,表达重组Attacin蛋白,并在大肠埃希菌中体内检测Attacin的抗菌活性。利用亲和层析柱纯化重组融合蛋白Attacin,SDS-PAGE进行纯度分析,琼脂糖平板抑菌试验鉴定其生物活性。结果pET30a(a+)/Attacin和pGEX-4T-1/Attacin重组质粒分别转化大肠埃希菌后,以IPTG诱导表达,与未诱导对照相比,含有重组质粒的宿主菌生长受到抑制,从pET30a(+)/Attacin重组质粒的表达宿主菌中未能获得His-Attacin融合蛋白,而从pGEX-4T-1/Attacin重组质粒转化菌种获得GST-Attacin融合蛋白。SDS-PAGE分析表明Attacin重组蛋白分子量与预期结果一致,琼脂糖平板抑菌试验显示重组Attacin具有抗菌活性。结论Attacin基因在原核系统中成功表达,并且纯化后具有抑菌活性,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定了基础。

摘要：目的 构建家蝇幼虫抗菌肽的真核表达载体,并检测它在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达情况.方法 以pUCm-T/Defensin为模板,设计带His标签特异引物,扩增C-末端融合6×His标签的Defensin基因的cDNA全长编码区序列,将其克隆至pcDNA3.1（＋）真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以阳离子脂质体Lipofect AmineTM 2000转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定转染的阳性克隆细胞,以RT-PCR分析其mRNA的转录情况,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以Western免疫印迹鉴定蛋白质表达情况.结果 构建了pcDNA3.1 （＋）-Defensin-His表达质粒,建立了稳定转染的CHO细胞系.RT- PCR从阳性克隆CHO细胞系中扩增出320 bp大小的目的片段,从转录水平证实pcDNA3.1（＋）-Defensin-His重组细胞株表达了Defensin基因.Western免疫印迹检测可见相对分子质量为10000的阳性条带,表明Defensin-His在该细胞系中成功表达.结论 成功构建了质粒pcDNA3.1（＋）-Defensin-His,并获得了稳定表达的CHO-Defensin细胞株,有利于进一步研究家蝇幼虫抗菌肽Defensin基因的生物学功能.

摘要：目的　对家蝇幼虫天蚕素基因进行克隆和序列分析。　方法　根据Genbank公布的家蝇成虫天蚕素Ce cropin基因序列设计一对引物 ,以家蝇幼虫cDNA文库液为模板 ,PCR扩增该基因的编码区序列。　结果　家蝇幼虫天蚕素cDNA目的基因的长度为 2 2 9bp ,与成虫防御素基因一致性为 96% ;最大的ORF位于 2 0bp～ 2 11bp ,含 192bp ,编码 63个氨基酸。　结论　初步预测了该基因编码蛋白的化学性质和二级结构 ,为该基因的重组表达研究打下基础。

摘要：目的比较民工子弟学校与普通学校初中生急救知识、急救态度、急救行为的差异性。方法 2013年6—12月采取自行设计问卷,对整体随机抽样的玉环县3 02名民工学校学生和3 35名普通学校学生进行调查。结果普通学校学生心肺复苏术、异物梗喉救护、肢体外伤救护、眼外伤救护、烧烫伤救护、触电防护、食物中毒急救等项目知晓率均明显高于民工子弟学校,各项目急救态度持有情况及对于有人倒地去急救、有人流血去包扎情况均好于民工子弟学校,差异有统计学意义(P<0.01)。结论家庭环境、学校环境不同对初中生急救知识知晓率、急救态度、急救行为养成有较大影响,应根据不同学校类型制定培训方案,加强培训工作。

摘要：目的分离鉴定犬钩虫C型凝集素AcaCTL-1基因,并在大肠埃希菌中表达。方法根据EST序列设计引物,用RT-PCR及3′(RACE技术扩增获得AcaCTL-1全长cDNA序列,并对其进行初步生物信息学分析;将AcaCTL-1成熟肽编码序列克隆、连接到表达载体pET32a,构建重组质粒pET32a/AcaCTL-1;在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE分析表达情况,Ni亲和层析纯化可溶性蛋白。结果成功克隆了AcaCTL-1全长cDNA序列,其最大开放阅读框由525 bp组成,预测编码174个氨基酸残基组成的蛋白,含17个氨基酸组成的信号肽,为C型凝集素家族蛋白成员;构建pET32a/AcaCTL-1重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达。表达产物多以包涵体形式存在,小部分为可溶性蛋白。结论成功克隆并表达了犬钩虫C型凝集素AcaCTL-1基因,为进一步了解AcaCTL-1的功能奠定了基础。