摘要：目的 :通过噬菌体展示技术筛选 i NOS特异性抑制肽。方法 :将 i NOS FAD结合区及其附近序列的基因片段装入 p ET-2 8a( + ) ,在大肠杆菌 BL2 1 中表达 ,*** TM亲和层析柱纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白筛选Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,筛选 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果 :得到具有较高表达量的目的蛋白 ,经 *** TM柱亲和层析纯化后纯度大于 95 % ,以纯化蛋白筛选 Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,经 4轮筛选获得 1 0株 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序发现其中 5株序列完全相同 ,合成该 1 2肽 ,初步研究表明其对 i NOS表现为高浓度抑制 ,低浓度兴奋的作用 ,而对 n NOS及 e NOS则没有影响。结论 :以 i NOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对 i NOS活性具有特异性影响 ,可根据这些特征设计合成小分子前导药物 。

摘要：将人胰岛素样生长因子 Ⅰ（ＩＧＦ－ Ｉ）基因克隆到 ｐＥＴ１１Ｃ中，构建成 ｐＥＴＩＧＦ－ Ｉ表达载体，完成人ＩＧＦ－Ｉ基因在大肠杆菌中的高表达。方法：利用固相亚磷酸三酯法化学合成人ＩＧＦ－Ｉ基因的２条寡核苷酸片段，通过互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平成完整的ＩＧＦ－Ｉ双链ＤＮＡ片段，然后经酶切克隆于ｐＴＶ１１８Ｎ载体中，构建ｐＴＶＩＧＦ－Ｉ克隆载体并测定ＤＮＡ序列后，构建ＰＥＴＩＧＦ－Ｉ表达载体。结果：合成的人ＩＧＦ－Ｉ基因经测序证明与设计的一致，人 ＩＧＦ－ Ｉ基因在大肠杆菌中表达量高于 １０％。结论：选用大肠杆菌偏性密码子，小分子的人 ＩＧＦ－

摘要：目的探讨中药莪术的提取物——莪术醇修饰构建的肿瘤细胞疫苗对SGC-7901胃癌的抗瘤效应及联合新城鸡疫病毒(NDV)疫苗的综合效应。方法对SGC-7901胃肿瘤细胞进行系列处理,用莪术醇及NDV对其进行系列生物构建,修饰构建的瘤苗经免疫小鼠(1次/周×3)21天后,接种SGC-7901胃肿瘤细胞,根据设计观察各组抑制肿瘤肺转移、皮下结节形成、生存时间状况及LAK细胞的杀伤效应。结果经莪术醇修饰构建的SGC-7901肿瘤疫苗与对照组相比能明显阻止胃癌细胞的肺转移,显著抑制皮下肿瘤结节形成,明显延长荷瘤鼠的生存时间(P<0.05);用各组免疫接种后长期存活的脾细胞制备的LAK细胞,较同龄未免疫小鼠的脾细胞制备的LAK细胞具有更强的抗瘤效应(P<0.05);由NDV构建的疫苗的抗瘤作用低于莪术醇瘤苗组,莪术醇与NDV联合构建的瘤苗其抗瘤作用未呈现生物放大及相加效应。结论莪术醇修饰构建的SGC-7901新型肿瘤疫苗可以增强胃肿瘤细胞的免疫原性,对胃癌有较好的实验治疗作用。