摘要：采用正交试验设计,研究瓠瓜RAPD-PCR反应体系中5个反应组分的不同浓度对PCR扩增结果的影响,以期建立瓠瓜RAPD-PCR的最优反应体系。结果表明,在25μL的最优反应体系中各组分适合浓度为:1×PCR buffer,2.5mmol/L MgCl2,100μmol/L dNTP,0.2μmol/L引物,1U Taq DNA聚合酶,30ng模板DNA。通过梯度PCR测验,37℃为最适的退火温度。

摘要：利用正交设计L9（3^4），对瓠瓜ISSR—PCR反应体系的4因素（dNTP、71物、Mg^2＋、Taq酶）在3水平上进行优化试验，建立适合瓠瓜ISSR—PCR反应体系，结果表明，在25μL反应体系中，含1×PCRbuffer、200μmol·L^-1dNTP、0．5μmol·L^-1引物、2．5mmol·L^-1MgCl2、30ng模板DNA、0．75U的Taq酶为最佳处理；通过PCR梯度测验，瓠瓜ISSR扩增适宜的退火温度比Tm值高2～6℃。

摘要：为丰富瓠瓜分子标记库、开发瓠瓜SSR标记、寻找有效的瓠瓜种质资源鉴定方法,利用MISA软件对瓠瓜转录组测序获得的87 518条unigene序列进行筛选,共检测出11 029个SSR位点,发生频率为9.85%,分布距离为平均每8.3 kb有1个SSR位点。其中只包含1个SSR位点的unigene序列有6759条,其发生频率为7.72%;有1858条unigene序列含有2个及2个以上的SSR位点,发生频率为2.123%;有920条unigene序列属于混合形式的SSR标记,频率为1.051%。瓠瓜转录组中优势重复基序为单核苷酸、三核苷酸和二核苷酸,分别占总SSR位点的55.51%、25.41%和17.07%。A/T、AG/CT和AAG/CTT分别是单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸的优势重复基元,分别占总SSR重复类型的98.22%、55.39%和39.86%。用Primer 3.0共设计出8617对SSR引物,利用6对条带清晰、多态性稳定的SSR引物构建了36个品种的指纹图谱,部分位点具有高度的一致性,说明基因来源范围较小。聚类分析显示,在相似系数为0.68时将36个瓠瓜品种分为6类。其表明我国瓠瓜品种资源遗传多样性非常狭窄,利用现有瓠瓜资源开展品种选育潜力有限,应加强对野生特异种质的引进与发掘利用。利用瓠瓜转录组数据进行SSR标记开发,获得的SSR位点能为其遗传多样性分析和遗传图谱构建提供更丰富可靠的标记选择。