摘要：多肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)是DNA类似物,其生物性质稳定,不被核酸酶和蛋白酶消化降解。PNA遵循Watson-Crick规则和Hoogsteen规则与单链DNA(RNA)以序列特异性形成极其稳定的杂交二聚体或三聚体。根据PNA的生物特性,以PNA为基础的PNA探针和PCR钳制技术在肿瘤和老化研究以及染色体畸形、细菌和DNA点突变诊断等方面的应用日益增多。PNA协助的携带非天然氨基酸的氨基酰化tRNA的改造已获得成功,并且合成了人工蛋白。作为反义抑制药物,PNA在抑制细菌和病毒的基因表达以及蛋白质翻译方面也取得了初步成果。基于PNA的由RNA触发的药物释放系统设计巧妙,是十分有希望的靶向治疗药物。

摘要：目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。

摘要：目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。

摘要：目的分析恶性疟原虫棒状体颈部蛋白4基因(PfRON4)在红内期不同发育阶段的转录水平。方法用山梨醇结合等渗细胞分离液(Percoll)对实验室体外培养的恶性疟原虫进行均一化处理,收集间隔为6h不同发育阶段的疟原虫,提取RNA。根据PfRON4基因及相关基因(PfAMA1和PfRhopH2)的序列设计特异性引物,构建标准质粒并制作标准曲线,对PfRON4及相关基因的mRNA进行定量检测分析。结果纯化并同步后的疟原虫生长发育较为同步均一,用于定量分析的标准曲线相关性较好,PfRON4、PfAMA1和PfRhopH2的相关系数(r值)分别为-1.00、-0.98和-0.98。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示,在恶性疟原虫红内期发育过程中,PfRON4基因的转录水平在裂殖子入侵红细胞后36～40h(即成熟裂殖体阶段)达到高峰。结论恶性疟原虫PfRON4基因在成熟裂殖体阶段高表达。