摘要：目的结合计算机虚拟筛选和实物活性筛选,寻找新的TNF-α的小分子抑制剂,并完成对其生物学活性的测定。方法基于TNF-α受体蛋白的晶体结构和计算机辅助设计,用docking方法对含有约9万个小分子三维数据库进行筛选;选择对接结果较好的50个化合物进行初步的抑制TNF-α细胞毒活性实验;MTT法进一步分析筛选出的小分子化合物的细胞毒性,以及其在不同剂量时抑制TNF-α对L929细胞毒性的作用;采用AnnexinV-FITC检测上述小分子对TNF-α诱导的细胞凋亡的抑制作用。结果确定受体p55蛋白第二结构域的第二loop环中7肽(RKEMGQV)作为docking的配体模板;经计算机虚拟筛选后得到965种结构相似的化合物,综合分析后最终选择并购买了50个代表性化合物做进一步生活性测定;活性筛选结果显示有3个小分子化合物(C-12、C-34、C-35)能抑制TNF-α的细胞毒活性;对其中抑制活性较好的C-12进行了深入研究的结果表明:该化合物具有较低的细胞毒性和较强的抑制TNF-α(1μg.L-1)对L929细胞毒性的作用,表现为剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为10μmol.L-1;该化合物能抑制TNF-α诱导的L929细胞凋亡,并呈剂量依赖性。结论通过计算机虚拟筛选并结合生物活性分析,筛选到一种能直接靶向TNF-α,并能中和TNF-α的细胞毒活性的全新的先导化合物。

摘要：目的:研究ERGIC-53基因表达与肿瘤细胞耐药的关系,寻找肿瘤耐药逆转可能的新靶点。方法:采用Northern Blot检测ERGIC-53基因在K562和K562/A02中的表达差异;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测11种肿瘤敏感及耐药细胞系中ERGIC-53基因的表达;设计合成针对ERGIC-53基因的siRNAs,用脂质体法转染K562和K562/A02细胞,用MTT比色法和流式细胞仪检测其干扰耐药细胞中ERGIC-53基因表达后的细胞对阿霉素的敏感性。结果:ERGIC-53在K562/A02细胞中的表达明显高于亲代K562细胞(P<0.05);6种耐药细胞株中ERGIC-53基因表达的平均值约为亲代敏感细胞的2倍。siRNA转染组与对照组相比,K562/A02细胞对阿霉素的敏感性均有不同程度的提高,且在转染后72h时细胞内阿霉素积累接近其亲代敏感细胞水平。结论:ERGIC-53基因与肿瘤细胞耐药相关,明确该基因参与耐药肿瘤细胞表型的形成。