摘要：目的建立牛棒状杆菌(***)环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法根据牛棒状杆菌16S rRNA基因保守区域设计一组特异性引物,对反应条件进行优化并对特异性和敏感性进行分析。结果建立的LAMP扩增方法仅能检测出牛棒状杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增,检出牛棒状杆菌的最低模板量为118 fg/μL。结论建立的牛棒状杆菌LAMP检测方法操作简单、快速高效,结果易于观察,对仪器设备要求低,可用于牛棒状杆菌的快速检测。

摘要：目的建立基于PCR-LDR平台的近交系小鼠SNP快速分型方法,用于检测实验小鼠的遗传质量与品系纯度。方法利用可移植性极高的PCR-LDR技术,以常见近交系小鼠为研究对象,选取了21条染色体上的45个SNP位点,分别设计引物和探针,经过筛选和验证,建立了多重PCR-LDR(polymerase chain reaction and ligase detection reaction,PCR-LDR)分型方案。结果四组多重PCR-LDR可实现45个SNP位点的基因分型,其中43个、44个与45个SNP在样本中的检出率分别为100%、90.9%与36.4%。所有样本经分型确定为纯合体,并得到了常见近交系小鼠SNP位点信息。结论实现了常见近交系小鼠快速、高通量的基因分型,可用于遗传质量检测和品系鉴定。

摘要：笔者设计了 3 4对特异性引物 ,以 PCR方法对部分近交系小鼠基因组微卫星多态性进行了检测和分析 ,在所有 3 4条引物扩增带中 ,有 2 5个微卫星位点的长度在不同品系小鼠中存在差异 ,不同品系小鼠之间微卫星长度多态性差异在3 8.3 %～ 5 8.8%之间。微卫星多态性分析是一种快速、经济的遗传监测近交系动物的方法 。

摘要：根据弓形虫 P30基因序列设计二对引物分别进行了 PCR一次扩增和套式扩增 ,结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段 91 4bp、5 2 2 bp和 5 2 2 bp;套式扩增出现的条带比一次扩增出现的条带亮度明显增强。提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性。用外引物进行扩增后 ,最低可以检测到 1 pg的弓形虫 DNA。说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的 ICR小鼠血液、组织进行弓形虫 DNA的检测 ,结果均扩增出 5 2 2 bp的扩增带。根据 B1基因序列设计的引物进行 PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段 61 9bp、362 bp和 362 bp;用半套式扩增检测感染弓形虫的 ICR小鼠血液、组织时可扩增出5 2 2 bp的扩增带 ,半套式扩增比一次扩增更敏感。

摘要：目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。

摘要：根据编码31-kDa布氏杆菌蛋白的基因(BSCP31),设计两对引物。对布氏杆菌R型(粗糙型)抗原及S型(光滑型)抗原、大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌分别采用两种提取、纯化DNA的方法,并以纯化的各细菌DNA为模板,分别进行内、外引物PCR反应及套式PCR反应,反应时以灭菌超纯水作为空白对照。结果显示:进行内、外引物PCR反应和套式PCR反应时,布氏杆菌R型及S型均出现预期的扩增带594bp、460bp及460bp,且套式扩增后条带亮度明显增强,而作为验证PCR特异性或对照的大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌、灭菌超纯水均无扩增带。验证敏感性时用外引物对布氏杆菌R型、S型DNA进行扩增后,最低可检测到1pg的布氏杆菌DNA。

摘要：根据具有高度保守性的编码VP7轮状病毒糖蛋白的基因9序列设计引物,分别进行RT-PCR和NT-PCR扩增,结果:引物Beg9/End9、Beg9-1/End9-1及引物RVG9/aET3、RVG9/aET3-1分别能在一次RT-PCR扩增中出现预期的1062bp和374bp扩增带;引物RVG9/aET3、RVG9/aET3-1在NT-PCR扩增中均能出现预期的374bp扩增带;验证了猴轮状病毒SA11属于血清型3;引物RVG9/aET3进行敏感试验能检测到0.5pg的轮状病毒(SA11)dscDNA。

摘要：目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法(PCR方法)并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物,以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板,犬细小病毒扩增出221bp的特异带,将PCR产物连接到pMD18_T Vecter,转化大肠杆菌JM109菌株。重组质粒经测序并经blast比较,与GenBank中已登录的犬细小病毒VP2基因序列进行比较。同时将建立的PCR方法应用于30份犬粪便和病犬组织的检测,并测序。结果PCR产物测得的序列与GenBank的基因序列同源性为100%,粪便检测均无犬细小病毒的特异带,从病犬组织中有6份样品扩增出221bp的特异带,经测序比较,同源率为100%。结论建立了犬细小病毒的PCR检测方法,并能应用于临床诊断。

摘要：以 La Sota毒株和分离到的 4株分别来源于信鸽、肉鸽和鸡的新城疫毒株为研究对象 ,设计了 3对引物用反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)对它们的融合蛋白基因 (F)进行分段扩增 ,并且采用 SDS-PAGE进行结构蛋白分析。两者的综合结果显示毒株之间存在着差异关系 ,具有显著的多态性 :来源于肉鸽的毒株与 La Sota株最为接近 ,而来源于鸡的强毒株与La Sota株差异最显著 ;来源不同的 2株信鸽之间有程度较轻的差异 ,肉鸽和信鸽的毒株之间差异较为明显 ,鸽新城疫和鸡新城疫之间的差异关系较为复杂。表明新城疫病毒存在高度变异性。

摘要：建立了伪狂犬病病毒的PCR检测方法,并将沪株伪狂犬病病毒的gE基因扩增片段进行测序和比较分析。根据伪狂犬病病毒gE和gB基因序列设计两对引物,以伪狂犬病病毒SH株DNA和单纯疱疹病毒I型为模板,产物连接到pMD18-T Vector。重组质粒测序后与闽A株序列比较,同源性为98%,与Genebank中已登录的伪狂犬病病毒gE基因序列进行blast比较,同源性在97%以上。gE基因序列比较保守,在疫苗应用及分子诊断方面均有较大的价值。