摘要：根据GenBank中鸭Ⅰ型肝炎病毒的基因序列,设计合成一对引物和一条Taq-Man探针。进行优化后,建立了能够检测鸭Ⅰ型肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。该方法敏感性好,检测敏感性达到20个模板拷贝数,比常规PCR灵敏度高100倍;该方法特异性强,对番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鹅细小病毒等6种病原体的检测全为阴性。对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测,结果阳性率为1.69%。结果提示:在广西地区的鸭群中,存在鸭Ⅰ型肝炎病毒的感染,建立的荧光定量RT-PCR方法可用于鸭Ⅰ型肝炎病毒的临床快速检测。

摘要：为了建立一种能快速检测衣阿华支原体(MI)的方法,根据基因库中MI种蛋白基因(species pro-tein 1)的保守序列,设计了1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了用以可视化检测衣阿华支原体的LAMP方法。结果显示,用此LAMP方法对衣阿华支原体的检测结果为阳性(肉眼观察可见翠绿色),而对其他常见病原体的检测结果均为阴性(肉眼观察可见桔红色),敏感性可达10fg DNA,高于常规PCR 100倍;该方法可在1h内完成,可通过肉眼观察颜色直接判定结果。结果表明,建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于禽MI感染的快速检测。

摘要：为建立一种能鉴别鸡毒支原体强弱毒株的快速检测方法,根据GenBank中鸡毒支原体S6株的16SrRNA基因序列和F弱毒疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计2套环介导等温扩增引物,建立了鸡毒支原体强弱毒株的环介导等温扩增可视化鉴别检测方法。该方法的敏感性可达10fg,是常规PCR方法的100倍,对其他鸡常见病原体的检测结果均为阴性。全部反应只需一个可控温的水浴锅在1h内即可完成,通过肉眼观察颜色直接判定结果。本研究建立的环介导等温扩增方法简便、快速、灵敏、特异,是一种适于基层工作站的鸡毒支原体强、弱毒株鉴别检测方法。

摘要：为建立能够快速检测鸡滑液支原体(MS)的检测方法,本研究根据GenBank中MS热休克ATP依赖蛋白酶基因的保守序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了MS的LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达102拷贝DNA,高于常规PCR方法 10倍;全部反应可以在1 h内完成;可以通过肉眼观察钙黄绿素颜色变化直接判定结果;对其它常见病原体的检测结果均为阴性。结果表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可以用于MS感染的快速检测。

摘要：为建立快速、准确检测H1亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的方法,本研究针对H1亚型AIV血凝素(HA)基因保守区设计合成了2对特异性引物并优化反应条件进行巢式PCR反应。特异性和敏感性试验结果表明,该PCR方法能特异性检测到H1亚型AIV,其敏感性最低能检测到13.2 fg/μL的H1亚型AIV RNA模板。本研究建立的巢式PCR方法为H1亚型AIV的早期诊断及有效防制提供了快速、特异且敏感的检测方法。

摘要：本研究旨在建立一种能同时检测(H5、H7、H9)亚型禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体和副鸡嗜血杆菌共9种鸡呼吸道传染病病原体的GeXP高通量检测方法。根据GenBank中这9种病原体的基因保守序列,设计了10对特异性引物。用所建立的GeXP多重PCR方法对单一、混合病原体进行检测,验证多重反应体系的特异性和准确性,以含靶基因的质粒来检测多重反应体系的灵敏度,并对38份阳性样品进行检测。该法能特异性检出9种鸡呼吸道病病原体,并可在1×102 copies/μL水平同时特异地检测出9种病原体,38份阳性样品的检测结果与实际相符。本研究建立的同时鉴别9种鸡呼吸道病原体的GeXP检测方法具有高通量、特异性强、灵敏度高的特点,为同时鉴别这9种临床症状相似的疾病提供了新型检测方法。

摘要：根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛轮状病毒(BRV)的保守基因设计了两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为2个温度梯度,建立了用于同时检测BVDV和BRV的二温式多重PCR方法,扩增长度分别为244和385 bp。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV和BRV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;检测灵敏度高,最低能检测到BVDV和RBV各1 pg病毒RNA。建立的BVDV和BRV二温式多重PCR方法,是一种快速、特异、敏感的检测方法。

摘要：应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种H7亚型和N9亚型禽流感病毒(AIV)可视化快速检测方法。根据GenBank中H7亚型和N9亚型AIV HA和NA基因序列,在其保守区域设计筛选出H7亚型和N9亚型AIV的特异性LAMP引物各一套,优化反应条件,建立能检测H7亚型和N9亚型AIV RT-LAMP方法,并进行特异性和敏感性检验。结果显示,该法用实时浊度仪63℃反应1h,能特异性地检测H7亚型和N9亚型AIV,而对其他15个H亚型和8个N亚型的AIV和禽类呼吸道病原体均无扩增,最低能检出10拷贝·μL-1目的基因。所建立的H7亚型和N9亚型RT-LAMP方法特异性强、敏感性高,结果可视化,操作简便、快速,为H7、N9和H7N9亚型AIV的有效防控提供技术支撑,具有较好的应用前景。

摘要：根据Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因保守区序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了一种适用于Ⅰ群禽腺病毒的LAMP快速检测方法。经检测,该方法的敏感性可达1×101copies/μL;对Ⅰ群禽腺病毒12个血清型的检测结果均为阳性,而对产蛋下降综合征病毒(EDSV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、禽传染性法氏囊病病毒(IBDV)和禽传染性支气管炎病毒(IBV)的检测结果均为阴性;分别用建立的LAMP方法与常规PCR方法对24份临床疑似样品进行检测,结果检出阳性率分别为58.3%和37.5%。表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异性高,可用于Ⅰ群禽腺病毒感染的快速诊断。

摘要：根据迟缓爱德华氏菌株23SrDNA基因,设计合成一对引物XZE15、XZE16,建立了二温式聚合酶链反应(PCR)鉴别诊断迟缓爱德华氏菌株的技术。特异性试验表明,对3株迟钝爱德华氏菌株进行PCR扩增出与预期大小相一致的284bp的特异性片段,但对3株钻鱼爱德华氏菌及其他对照鱼病病原体核酸模板的PCR扩增不出现任何条带;敏感性试验结果显示,该二温式PCR可以检测到10pg的迟钝爱德华氏菌DNA。