摘要：目的了解全髋关节置换术（THA）患者住院期间的功能锻炼的状况。方法采用自行设计的THA患者功能锻炼结构观察提纲，观察并收集71例（91个髋关节）接受THA患者的相关的资料。结果术后前3d，22．5％的患者没有进行锻炼；术后14d内做持续性被动运动（CPM），进行髋关节练习的患者分别占71．8％和81．7％，做肌肉静力性收缩、直腿抬高的患者分别占40．8％和81．7％，以上4项锻炼开始时间较晚，锻炼的方法也不规范，坚持时间较短；[单髋置换与双髋置换患者下地行走路练习的开始时间分别为术后（6．51±2．90）d和（10．30±3．21）d，在功能锻炼功程中，CPM由护士协助进行，其他锻炼主要由患者家属及护工协助进行]。结论THA患者住院期间实际进行锻炼的人数、次数、时间与方法不尽相同，护理人员应该进一步探讨如何保证患者进行切切实实有效的康复锻炼，以进一步提高患者的康复锻炼效果。

摘要：目的在piggy Bac(PB)转座子介导下,探索在HepG2细胞中实现多个药物代谢酶稳定共表达的策略,为建立体外药物代谢和肝毒性研究的理想细胞模型奠定基础。方法首先选择3种目前针对大片段DNA使用较广的转染方法:Lipofectamine~?LTX,Gen Jet^(TM)(Ver.Ⅱ)和Neon~?Transfection System,分别转染N端标记增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-N2)和2A串联重组细胞色素3A4(CYP3A4)和CYP2C19的PB转座子质粒(pPB-CYP3A4-2A-2C19)至HepG2细胞,48 h后比较不同方法的转染效率和细胞毒性,确立高效低毒的HepG2细胞转染方法。然后选择该法进行转染,将设计的3组PB重组转座子:单基因转座子(PB-CYP3A4)、2A串联多基因转座子(PB-CYP3A4-2A-2C19)、多个单基因转座子混合物[PB-CYP3A4,PB-CYP2C8,PB-CYP2A6,有机阴离子转运多肽1B1的PB转座子(PB-OATP1B1)]分别转染HepG2细胞,利用嘌呤霉素和GFP进行单克隆细胞筛选:挑选具有抗性且表达GFP的细胞单克隆并进行扩大培养,采用实时荧光定量PCR、Western蛋白质印迹和高效液相色谱-串联质谱联用法分别检测各组药物代谢酶m RNA、蛋白质水平及酶活性,并进行统计分析。结果 3种转染方法比较发现,Gen Jet^(TM)法的转染效率显著高于其他2种(P<0.01),介导pEGFP-N2和pPB-CYP3A4-2A-2C19的转染效率分别高达(94.2±2.5)%和(89.3±3.3)%,且该法具有较低的细胞毒性。因此选择Gen Jet^(TM)法进行后续PB转座子转染。分别转染3组PB重组转座子发现,单个转座子PB-CYP3A4和PB-CYP3A4-2A-2C19转染后,筛选获得的抗性细胞克隆中各个药物代谢酶在m RNA、蛋白质及活性水平均显著提高,其中2A可实现CYP3A4和CYP2C19药物代谢酶协同稳定表达;而多个转座子混合共转染细胞中,仅有随机几个基因表达;且各药物代谢酶基因的表达不均衡,仅CYP3A4药物代谢酶基因在单克隆细胞中表达水平明显升高。结论 Gen Jet^(TM)法可成为PB重组转座子转染HepG2细胞的有效方法。PB转座子可介导基因稳定表达;但在实现多基因共表达时,与病毒载体法不同,理论上可行的PB多转座子共转染方法其基因表达效率下降,且各基因表达不均衡。相比之下,应用2A串联多个基因串联重组PB单转座子可实现各基因稳定表达。

摘要：目的应用改良分子信标探针建立多重实时荧光PCR方法快速检测产毒性大肠杆菌。方法通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)下载产毒性大肠杆菌肠毒素基因Stp、Sth、Lt的基因序列,设计引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系,应用于感染性腹泻病原体中ETEC的快速筛查。结果改良分子信标多重荧光PCR反应体系,1管内同时检测ETEC的Stp、Sth、Lt三个毒素基因的方法具有简单、快速、省时、灵敏度高的特点,从核酸提取到检测结果仅需3h,最低检出限可达3×102CFU/m L,稳定性良好,且无交叉反应,与普通PCR相比,灵敏度和特异度分别为100%和99.92%,kappa值为0.87,一致性良好。结论本研究建立了一种用于检测产毒性大肠杆菌的方法,具有简便、快速和高效的特点,适合用于ETEC的临床诊断。