摘要：目的建立一种快速、特异的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,用于高危型人乳头状瘤病毒感染的快速检测。方法根据GenBank公布的人乳头状瘤病毒16的E7基因序列设计一对特异性引物和TaqMan探针,提取组织DNA,优化反应体系与条件,建立基于TaqMan探针的FQ-PCR检测HPV E7基因的方法,对方法的敏感性、特异性和重复性进行评价。结果所设计的引物与探针能特异性地扩增出HPV16 E7基因,熔解曲线峰值单一,对应温度值与预期值相同,产物经琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量与预期一致,最低检测下限可达10 fg,且扩增效率达到96.0%,扩增产物测序后经Blast比较具有很高的特异性,设计的反应体系与条件具有稳定的可重复性。结论建立的FQ-PCR方法能特异、敏感地检测高危型人乳头状瘤病毒E7基因,可应用于临床检测及宫颈癌筛查工作。

摘要：目的克隆人结核杆菌Ag85C基因并在大肠杆菌中表达,研究其对结核病预防和治疗过程中的免疫保护作用。方法设计一对特异性引物,PCR扩增人结核杆菌Edman株Ag85C基因开放阅读框并定向克隆到原核表达载体pQE30,通过酶切、PCR和测序鉴定重组质粒,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白。结果构建了pQE30-Ag85C重组质粒;在大肠杆菌中表达了一分子量约30kDa的重组蛋白。结论重组质粒pQE30-Ag85C构建成功并在大肠杆菌中高效表达,为Ag85C保护性抗原位点分析和新型疫苗的研制奠定了基础。

摘要：目的建立一种快速、特异性、敏感地检测淋球菌致泌尿生殖道感染的16SrRNA-PCR基因诊断方法,以了解泌尿生殖道感染中淋球菌的感染情况。方法以淋球菌16S核糖体rRNA基因为扩增靶点,设计一对特异性的引物扩增靶基因片段,扩增的片段长度为260bp,扩增产物通过ABI3130 DNA Analyzer进行测序,测序结果同Genebank报道的序列进行比较,评价该方法的特异性;对淋球菌模板进行10倍比稀释,进行16SrRNA-PCR,对其敏感性进行分析,对PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定。结果泌尿生殖道感染中通过16SrRNA-PCR扩增可检出淋球菌16SrRNA基因,通过序列分析证实了PCR产物的特异性;在敏感性检测中16SrRNA-PCR检测淋球菌模板的下限为6.41×10-4μg/ml。结论本研究建立的16SrRNA-PCR法检测泌尿生殖道淋球菌感染具有简便、特异、快速的特点,可作为临床上女性宫颈分泌物及尿液标本的检测。

摘要：目的对生殖支原体(Mg)16Sr RNA基因和Mg Pa基因Taq Man荧光聚合酶链反应(PCR)检测结果进行比较,选取敏感度更高的靶基因进行Taq Man荧光PCR检测。方法选取Mg 16Sr RNA基因和Mg Pa基因为靶基因,根据已报道文献设计合成特异性扩增引物和探针,对泌尿生殖道拭子标本进行Taq Man荧光PCR检测,对Mg不同靶基因Taq Man荧光PCR检测结果进行统计学分析。结果 Mg 16Sr RNA基因Taq Man荧光PCR检测敏感性为90%,Mg Pa基因Taq Man荧光PCR检测敏感性为97.5%。结论 Mg Pa基因Taq Man荧光PCR敏感性要高于16Sr RNA基因Taq Man荧光PCR。

摘要：目的构建pcDNA3.1(+)淋病奈瑟菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface Protein A,NspA)基因真核表达载体,为研制淋病奈瑟菌核酸疫苗奠定基础。方法根据淋病奈瑟菌NspA基因序列,设计合成一对引物,用PCR方法从淋病奈瑟菌基因组DNA中扩增出NspA基因片段,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1(+)/NspA,进行酶切、PCR及测序鉴定。结果NspA基因体外扩增产物大小约为525 bp。所构建的pcDNA3.1(+)/NspA重组体经双酶切及PCR鉴定,与预期片断的大小相符;测序结果与GenBank中收录的NspA全长序列一致,表明pcDNA3.1(+)/NspA真核表达载体构建正确。结论成功地构建了淋病奈瑟菌真核重组表达载体pcD-NA3.1(+)/NspA,为NspA蛋白的功能研究和淋病奈瑟菌核酸疫苗的研制提供了物质基础。