摘要：为建立可视化环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)鉴定冬虫夏草的方法,根据冬虫夏草csp2(serine protease-2)基因设计引物,采用CTAB法提取亚香棒虫草,古尼虫草和冬虫夏草的基因组DNA.并在LAMP反应体系优化的基础上,进行特异性和灵敏度检测.在LAMP产物中加入CuSO_4或SYBR Green Ⅰ核酸染料.结果表明,经优化最适反应温度为65℃,最佳反应时间为60 min.电泳结果显示,该法可特异性检测出虫草真伪,其灵敏度检测限为6.34 pg/mL.反应结束后,添加SYBR Green Ⅰ,在紫外灯下进行观察阳性管呈明显的绿色荧光.加CuSO_4后,在可见光下进行观察,阴性管中有蓝色环状沉淀.因此,本研究建立的可视化LAMP为鉴定冬虫夏草真伪提供了一种参考方法.

摘要：通过设计和合成TNFRSF1A基因的3条靶向shRNA,并分别插入到pSGU6/GFP/Neo载体中,成功构建出了3个干扰载体,通过脂质体介导法将干扰载体成功转入到内蒙古绒山羊胎儿成纤维细胞中,并利用RealTimePCR检测TNFRSF1A基因的表达量。由结果可知,TNFRSF1A基因的干扰载体经测序鉴定证明构建成功,干扰载体转染内蒙古绒山羊胎儿成纤维细胞24h后可见绿色荧光表达,当到达48h时,转染效率达到最大,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3三组中TNFRSF1A的mRNA表达水平均低于转染空载体的NC组,且shRNA2对TNFRSF1A的mRNA表达具有最佳的干扰效果。综上所述,该研究成功构建了TNFRSF1A干扰载体,为进一步研究绒山羊TNFRSF1A基因在毛囊生长与周期调控的作用奠定基础。