摘要：【目的】建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,为猪增生性肠炎的准确诊断奠定基础。【方法】针对胞内劳森菌16SrDNA序列设计引物,扩增16SrDNA,构建pT-LI-16S重组质粒。以pT-LI-16S为模板建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,检测其特异性、敏感性和重复性,并用该方法对51份疑似增生性肠炎病例进行检测。【结果】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强,与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副猪嗜血杆菌等无交叉反应;在标准质粒含量为1.0×10^2-1.0×10^8拷贝/μL时,质粒含量与循环阈值（Ct）之间具有良好的线性关系（R^2=0.992）,最小可检测到10拷贝/μL的重组质粒;重复性检测显示其批内变异系数小于2%。该方法对粪便及小肠组织中胞内劳森菌的检出率分别为46.9%和84.2%,高于普通PCR的检出率（分别为40.7%和78.9%）。【结论】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能对胞内劳森菌进行快速检测及定量分析,可用于猪增生性肠炎的诊断。

摘要：从不同类型的高中生物学实验入手,以虚实结合为原则,探究在高中生物学实验中如何运用虚拟仿真实验,建构符合教学实际的应用路径,以提高高中生物学实验的教学效果。根据实验类型的不同,建构不同的有效应用路径:演示实验,先实后虚,优化实验效果,突破重难点;模型建构实验,先虚后实,发展学生空间思维能力;验证性实验,先虚后实,突破时间、空间的限制,快速掌握实验步骤;探究性实验,先虚后实,突破实验方案设计,拓展学生科学思维。