摘要：对早先建立的甲醇营养型重组毕氏醇母(Pichiapastoris)结构模型的产物生成部分进行了动态改进.甲醇流加初期蛋白生成所需的酶系尚处于诱导期,为了描述该酶系浓度和活性从低到高对产物比生成速率的影响,引入了一阶闭环调节器模型加以逼近,同时考虑了细胞体积增大对胞内酶系浓度的稀释作用.设计了6次实验以验证模型的有效性.结果表明,该模型能对细胞生长和蛋白生成给出满意的描述,同时,各罐批间参数变化不是很大,表明该模型具有较强的鲁棒性.

摘要：目的　建立一套简便、快速、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系 ,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台 ;认识 PKS- I基因在不同环境放线菌群中的分布规律 ,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据。方法　通过对大环聚酮类化合物生物合成途径所用的 I型聚酮合成酶氨基酸和核苷酸序列的同源性比较分析 ,设计了一对引物用于扩增 KS/ AT功能域约 1.6 kb目的基因片段 ,依据放线菌基因组中 I型 PKS合成酶基因的存在与否标定可能的大环聚酮类天然产物产生菌。结果　利用建立的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系对 98株嗜碱放线菌、99株链霉菌、46株嗜盐放线菌和 75 7株稀有放线菌进行了筛选 ,研究表明嗜碱放线菌、链霉菌、嗜盐放线菌和稀有放线菌 I型聚酮合成酶基因的阳性率分别为 2 6 .5 %、2 0 .4%、15 .2 %和 9.35 %。结论　利用组合放线菌基因组 DNA快速提取技术和 PKS- I基因兼并引物 PCR扩增技术建立了快速、简便、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系 ,并对不同环境条件的放线菌菌群的PKS- I基因分布进行了研究 ,结果不仅表明了放线菌 PKS I聚酮合成酶分布的广泛性 ,而且表明极端环境放线菌 ,尤其是嗜碱放线菌是大环聚酮类化合物潜在的丰富资源 ,为新药筛选有效菌源的确定提供了?

摘要：以抗体阻断血管生成信号来治疗实体肿瘤显示了很好的前景 ,但鼠源抗体首先必须经人源化改造以降低其免疫原性才能应用于人体。本研究以同源模建预测了一株人血管内皮生长因子 (VEGF)特异性鼠源单链抗体E11的三维结构 ,以结构数据为基础并采取单个最相似框架区替代法对其进行人源化设计 ;合成并组装了人源化单链抗体基因并在大肠杆菌中表达 ,包含体形式的产物以凝胶柱色谱法复性 ,经ELISA检测表明 ,人源化后的单链抗体保持了与天然VEGF结合的活性 ,表明采取的人源化路线具有可行性。

摘要：构建了hG CSF大肠杆菌融合分泌表达载体pSEGF ,利用该系统可直接将hG CSF融合蛋白分泌到培养基中 ,重组蛋白具有高度的可溶性 ,并具生物学活性。在该系统中 ,外源蛋白N端融合了金黄色葡萄球菌蛋白AIgG结合区 ,由lac启动子与金黄色葡萄球菌蛋白A启动子控制表达 ,信号肽选用金黄色葡萄球菌蛋白A的信号肽序列。在融合头与目的蛋白之间设计了蛋白酶识别位点 ,可用FactorXa蛋白酶特异切割 ,得到与天然氨基酸序列完全相同的重组hG CSF蛋白。该系统的构建成功 ,为简化下游纯化工艺 。