摘要：目的 基于核酸等温扩增技术,建立荧光法、可视化环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)和重组酶聚合酶扩增(recombinasepolymeraseamplification,RPA)快速检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的分析方法,并对方法进行优化和比较。方法 选择哈维氏弧菌toxR基因为特异靶标序列,分别设计了2组LAMP引物、3组RPA引物,对方法进行筛选。优化建立了荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA3种等温扩增方法,对3种方法的特异性和灵敏度进行比较,并用模拟污染样本验证检测实际样品的灵敏度。结果 基于快速提取的哈维氏弧菌基因组DNA,本研究所建立的荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA 3种等温扩增方法均具有良好的特异性,与同属及近属的细菌没有交叉反应。3种方法的灵敏度分别为5.27 fg/μL (1.99 fg/μL~0.93 pg/μL, 95%置信区间)、0.11 ng/μL、1.07 pg/μL;荧光LAMP和普通RPA对模拟污染样本的灵敏度分别为7 CFU/mL和97 CFU/mL。结论 本研究建立优化的3种等温快速检测方法结果准确、操作简单,扩增效率和灵敏度优于文献报道的同类方法,提高了哈维氏弧菌现场快速检测水平。