摘要：ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．

摘要：目的选择PF4,TSP1的高活性片段及肿瘤细胞靶向肽,设计合成融合基因-tTSF,进行酵母表达及小鼠基因治疗研究。方法根据PF4和TSP1的抑制血管生成高活性片段设计合成TSF基因,并在N-端接上肿瘤细胞靶向肽,设计合成了tTSF。将tTSF基因构建到pPIC9质粒,重组质粒pPICg／ tTSF转化GS115酵母菌株进行表达,并检测表达产物对血管内皮细胞生长的抑制作用。将tTSF基因克隆到pcDNA3．1(+)载体,重组质粒pcDNA3．1(+)／tTSF通过皮下注射治疗C57BL／6小鼠移植肿瘤 Lewis肺癌。结果重组质粒pPIC9／tTSF转化GS115酵母菌株后,获得了tTSF的高效表达,表达产物对血管内皮细胞生长产生明显的抑制作用;皮下注射重组质粒pcDNA3．1(+)／tTSF后,C57BL／6小鼠移植肿瘤Lewis肺癌的生长受到明显抑制。结论 tTSF基因设计成功,其酵母表达产物对血管内皮细胞生长产生具有明显的抑制作用,tTSF基因的体内基因治疗也具有显著的抗肿瘤效应。

摘要：目的　选择 PF4和 TSP1的高活性片段设计融合基因— TSF,在大肠肝菌表达 ,细胞水平上检测表达产物的生物学活性。方法　 PF4的 C—末端 13肽和 TSP1的 4 2 9～ 4 5 9片断 31肽通过 Gly-Pro- Gly肽桥设计为融合蛋白— TSF。采用 p GEX- 2 T载体在 *** JM10 9中表达 TSF蛋白。采用 MTT方法测定 TSF及其相关物 GST- TSF、PF4 (5 8- 70 )、TSP1(42 9～ 4 5 9)等对血管内皮细胞、平滑肌细胞、QGY772 1人肝癌细胞、HL F人肺成纤维细胞等生长的抑制效应。结果　合成的 TSF融合基因 ,克隆到p GEX- 2 T载体 ,转化 *** JM10 9,获得了 TSF蛋白的高效表达。建立了 TSF蛋白的纯化复性方法 ,获得了 GST- TSF融合蛋白及 TSF蛋白。TSF、GST- TSF、PF4 (5 8～ 70 )和 TSP1(42 9～ 4 5 9)均特异抑制血管内皮细胞的生长 ,其中 TSF的活性最强 ,活性大小次序为 TSF>GST- TSF>PF4 (5 8～ 70 ) >TSP1(42 9～ 4 5 9)。结论　融合表达蛋白— TSF在细胞水平上能高效特异抑制血管内皮细胞的生长。