摘要：建立可检测琉球病毒(Ryukyu virus,RYKV),索尔韦齐病毒(Solwezi virus,SOLV)以及苏里斯病毒(Souris virus,SOUV)等三种沙粒病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法。分析三种病毒流行病学分布特征,从国际公共数据库搜索下载基因组序列,进行比对分析,确定检测靶标,借助primer premier 6.0生物信息学软件,设计引物和探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,利用化学合成和体外转录方法制备模拟样本,比较评价三种方法的检测限、特异性、重复性特征。所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒RNA靶标,检测限分别为40拷贝/μL、7拷贝/μL和15拷贝/μL,检测汉城病毒、汉滩病毒、登革病毒Ⅰ~Ⅳ型分离株、发热伴血小板减少综合病毒及30份健康人血清样本无非特异性扩增,三种病毒相互间以及其他8种出血热相关沙粒病毒RNA间无交叉反应,重复性比较分析显示变异系数均在2%以内。本研究建立的检测RYKV、SOLV和SOUV三种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR方法具备用于相关疑似感染者临床样本、宿主动物标本以及进出口物品的筛查检测的潜力,但因未经基于实际病毒感染样本的比较评价,检测结果的解释仍具有一定的局限性。

摘要：目的 建立一种可以同时鉴别寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的检测方法。方法 通过全球共享数据库中检索下载寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒全基因组序列进行比对分析,估计其保守区,确定靶基因位置,针对这3种病毒分别设计特异性引物和探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对方法的特异性、灵敏性和重复性进行评估。结果 所建立实时荧光定量RT-PCR检测方法可检出寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒模拟样本,最低检出限分别为寨卡病16.22拷贝/PCR,基孔肯雅病毒12.02拷贝/PCR,马雅罗病毒体外转录RNA为2.82拷贝/PCR,三重组合检测与3种病毒分别单重检测,灵敏度无明显差别。与登革病毒、汉坦病毒、SFTS病毒、黄热病毒和流感病毒等无交叉反应,检测100份健康人体检血清样本未见非特异性反应,特异性为100%。重复性结果显示,通过选取高、中、低3个不同浓度梯度的病毒核酸或体外转录RNA,3种病毒的标准差均控制在0.5以内,变异系数在2%以下。结论 建立了寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。

摘要：Flexal病毒(Flexal virus,FLEV)和Whitewater Arroyo病毒(Whitewater Arroyo virus,WWAV)属沙粒病毒,经鼠传播,可引起人类严重传染病,主要分布于美洲,有因野外工程而感染或国际物流和人员往来而输入的风险。本研究通过检索、分析FLEV和WWAV基因组序列,参照同科属病毒遗传进化特征,确定病毒基因组保守区,筛选分子检测靶基因,设计PCR扩增引物和检测探针,建立两种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR检测方法,并进行灵敏性、特异性和重复性初步评价。结果表明,所建立的FLEV和WWAV检测方法与其他病毒无交叉反应,扩增效率大于95%,检出限分别为100copies/μL和20copies/μL,变异系数在2%以内。上述结果显示,本研究所建立的FLEV和WWAV检测方法的特异性强,灵敏性与重复性均处于常规病毒性传染病分子诊断可接受范围,可应用于疑似病例的快速检测和相关病原的筛查和流行病学调查。

摘要：目的建立可检测杜贝病毒(dugbe virus,DUGV)、盖勒尤卜病毒(qalyub virus,QALV)和蒂亚福拉病毒(thiafora virus,TFAV)等三种内罗病毒基因组的实时荧光RT-PCR检测方法。方法收集、整理,比对、分析在公共数据库发布的三种病毒基因组S节段核苷酸序列,确定检测靶标,利用生物信息软件设计特异性引物、探针,优化检测程序,建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒靶标RNA,检测限分别为160 copies/μL,20 copies/μL和10 copies/μL,检测科萨努尔森林病病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增,三种内罗病毒相互间无交叉反应,重复性分析显示变异系数均在2%以内。结论本研究建立的检测DUGV、QALV和TFAV的实时荧光RT-PCR方法,可用于相关临床样本、媒介、宿主动物标本以及进出口物品筛查检测。

摘要：分析了应用于装配式外墙板拼接缝的不同类型密封材料的性能优缺点,通过对装配式外墙板拼接缝防水失效原因以及材料受力破坏进行分析,指出了优化接缝设计、优化密封材料、严格施工工艺操作等保证装配式混凝土结构外墙板构件接缝密封防水质量的具体措施。