摘要：环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一项新的DNA扩增技术,近年来已被成功应用于转基因作物中外源基因的检测分析。本文针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(CaMV-35S)设计引物以及有效提取目标DNA后,首次建立了食用植物油中CaMV-35S启动子的LAMP检测方法。通过在DNA提取过程中加入正己烷乳化和加入共沉淀剂,获得了可以进行LAMP扩增的DNA片段,采用LAMP实时浊度法和染色法对扩增产物进行比较分析。着重对FIP/BIP引物、甜菜碱和Mg2+浓度等反应参数进行了优化。结果表明,LAMP方法能够在56 min内特异性地检测到CaMV-35S启动子,检测灵敏度比常规PCR高10倍,而且不需要特别的仪器设备,扩增产物可通过观察实时浊度曲线或通过SYBR Green I染色后借助肉眼对检测结果进行判断。该方法快速高效、操作简便、灵敏度高、检测结果准确,适合食用植物油中转基因成分的快速检测。

摘要：建立了食用植物油和地沟油中动物源性成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。针对猪、牛、鸡、鸭的线粒体Cytb基因分别设计2条外引物(F3、B3)、2条内引物(FIP、BIP)和2条环引物(FLP、BLP),着重对内引物FIP/BIP、甜菜碱和Mg2+浓度等反应参数进行了优化,扩增产物采用恒温实时荧光法检测。对方法的特异性和灵敏度进行了评价。实验结果表明,在0.2μmol/L外引物(F3和B3)、1.6μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.8μmol/L环引物(FLP和BLP)、1 mol/L甜菜碱、6 mmol/L Mg SO4、1.6 mmol/L d NTP、反应温度63℃等参数的优化条件下,上述四种物源性成分的扩增效果最佳,该方法可以检测出动物油脂质量比例为1%及地沟油质量比例为5%的混合油脂中的动物源性成分。本方法对猪、牛、鸡、鸭源性成份的检测具有很高的特异性和灵敏度,可以用于油脂中动物源性成分的检测,为油脂的鉴伪和地沟油的鉴别提供技术支持。

摘要：针对现有肉制品中鸭DNA成分检测方法不能检测番鸭DNA成分的问题,通过下载番鸭、家鸭及其相近物种的12SrDNA序列,使用CLUSTAL X2进行序列比对,筛选特异性序列,设计了一对通用引物及两条番鸭、家鸭特异性探针,构建了可同时检测番鸭、家鸭DNA成分的实时荧光PCR方法。结果表明:最终构建的检测方法可在掺伪量为0.1%的情况下,检测出样品中的家鸭或番鸭DNA成分。该方法相比普通PCR或单重荧光PCR检测方法节省了劳动力,提高了检测效率,补充了现有检测方法的不足,为更有效地识别掺伪肉类提供技术支持。

摘要：目的:为实现现场快速检测牛肉及其制品中牛DNA成分,建立基于荧光RPA技术的快速检测方法。方法:在细胞色素C氧化酶亚型Ⅰ中的黄牛、水牛、牦牛特异性DNA序列上设计RPA引物以及exo探针,对引物对进行组合筛选,结合核酸快速提取方法,建立荧光RPA快速检测方法,并对其特异性、灵敏度测试,通过方法比对实验验证其检测准确性。结果:所建立的检测方法具有很好的特异性,检测灵敏度低至1%(w/w),并且与标准方法检测结果一致。结论:研究成功建立了牛肉真伪鉴别荧光RPA现场快速检测方法。

摘要：鳕鱼营养丰富,深受消费者喜爱,但国内外有关鳕鱼产品标签错误标示的报道较多。为了解目前鳕鱼产品标签标示情况,对46批次常见类型鳕鱼产品的进行检测。使用SN/T 3589.7—2013对鳕鱼DNA成分检测,发现在10批次冰鲜鳕鱼产品中无法检出。使用最新DNA条形码技术鉴定,结果显示均为细鳞壮鳕,该种鱼类属于鳕形目。鳕鱼为鳕形目鱼类,因此此次检测的所有产品的标签标示均符合要求。该次研究发现了标准方法存在的不足,并自行设计了可用于细鳞壮鳕DNA成分检测的实时荧光PCR法。最终构建的检测体系特异性好,可检测低至0.1%的掺伪量。且在10批次样品中均可检出细鳞壮鳕DNA成分。此次研究对鳕鱼产品属性进行鉴别,同时发现了标准方法的不足,并针对此问题建立了细鳞壮鳕DNA成分检测方法,可作为标准方法的补充,为监管部门提供技术支持。

摘要：目的:为方便监管,实现现场快速检测牛肉产品中猪肉成分。方法:通过在细胞色素C氧化酶亚型I中的猪特异性DNA序列上设计RPA引物以及exo探针,对引物对进行组合筛选,结合核酸快速提取方法,建立exo探针-RPA法快速检测方法。对其特异性、灵敏度测试,通过方法比对实验验证其检测准确性。结果:所建立的检测方法具有很好的特异性,低至1%(w/w)猪肉含量可被检出,与标准方法比对结果显示检测结果一致。结论:成功建立了牛肉产品中猪肉成分的exo探针-RPA现场快速检测法。

摘要：[目的]将抗草甘膦转基因大豆中的CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS 3种外源基因融合在PMD-18T载体并建立三重实时荧光PCR检测方法,实现通过一次PCR反应就能完成抗草甘膦转基因大豆的转基因成分检测。[方法]通过PCR扩增和基因克隆的方法构建含有CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS外源基因的质粒,设计TaqMan探针建立三重荧光PCR检测体系。[结果]成功构建融合抗草甘膦转基因大豆3种外源基因质粒PMD18T/SOY,并建立三重荧光PCR检测体系,检测限值为10-3 ng/μL,线性关系良好r,2在0.998以上。[结论]构建同时含有多种外源基因的质粒作为转基因检测的阳性参照物并建立多重PCR检测体系,不仅可降低试剂成本、节省时间和人力,而且可以减少PCR反应次数和加样环节,降低PCR污染的几率。