摘要：根据GenBank报道的绵羊肺炎支原体（MO）基因序列,设计特异性引物,对MO新疆分离株（MO XJ）溶血素TlyC基因进行克隆及测序;并对该基因及其编码蛋白进行分子特征分析,并与其他支原体相应序列进行同源性分析,构建该基因系统进化树。结果表明,TlyC基因全长为1 239bp,编码426个氨基酸,其中第1-23位氨基酸残基为信号肽,编码区含有跨膜结构域和CBS结构域,二级结构以α-螺旋为主。系统发生分析表明,MO与猪肺炎支原体232株和絮状支原体的相应序列亲缘关系较近,而与其他种支原体的亲缘关系较远。研究首次克隆了MOTlyC基因,为了解MOTlyC生物学功能及其致病中的作用奠定了基础。

摘要：根据GenBank登录的MO HSP70基因序列,设计特异性引物对MO新疆分离株HSP70基因进行扩增,克隆入T载体中测序。将HSP70基因亚克隆入表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达载体pGEX4T-1-HSP70,并转化入大肠埃希氏菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白分子质量为53ku;Western blot分析表明该重组蛋白可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应,证实表达的重组HSP70具有良好的反应原性。重组HSP70蛋白免疫小鼠后可诱导机体产生特异性抗体,证实该重组蛋白具有良好的免疫原性。

摘要：为了研究绵羊Zfy基因干扰载体对性控效果的影响,本试验利用RNA干扰技术针对绵羊Zfy基因m RNA序列设计、构建3个sh RNA干扰载体(p LL3.7-A、p LL3.7-B和p LL3.7-C),并对体外培养的生精细胞进行转染,利用q RT-PCR测定Zfy基因m RNA表达丰度,从而筛选出有效的干扰载体。然后将效果较好的干扰载体通过绵羊睾丸注射,进行体内干扰试验。q RT-PCR检测结果显示:成功构建了3个干扰载体,其中p LL3.7-A、p LL3.7-B对生精细胞Zfy基因的表达水平分别下降了54%(P0.05);p LL3.7-A、p LL3.7-B干扰载体的体内干扰试验结果显示,后代雌羔率分别为64.7%(P0.05)。本研究结果表明,本实验构建的干扰载体对绵羊Zfy基因产生干扰作用,且使后代性别比例发生一定程度的偏移,为进一步研究绵羊性别控制提供了理论依据。

摘要：根据Gen Bank报道的绵羊肺炎支原体(MO)基因组序列,设计特异性引物,对MO新疆分离株黏附素基因和溶血素A基因进行PCR扩增、克隆及测序;应用分子生物学软件对该基因及其编码蛋白进行分子特征分析,并与其他支原体相应序列进行同源性分析,构建该基因系统进化树。结果显示:黏附素基因长为3426 bp,溶血素A基因长为777 bp;黏附素在第1-23位氨基酸残基为信号肽、1个跨膜区,可能为分泌型蛋白;溶血素A无信号肽和跨膜区、有RNA结合位点和甲基转移酶结合位点。系统发生分析表明,黏附素基因与猪肺炎支原体P146株进化关系较近,与其他的支原体进化关系远;溶血素A基因与猪肺炎支原体232株、结膜支原体HRC581株位于同一分枝上,进化关系近。本研究克隆了MO黏附素基因和溶血素A基因,为了解MO毒力相关基因生物学功能及其致病中的作用奠定了前期基础。