摘要：烟草青枯病、黑胫病和猝倒病是烟草生产中的重要病害,常发生复合侵染。以3种重要烟草病原菌基因组DNA作为目的基因,分别设计3对特异性引物,通过优化引物和模板浓度,摸索扩增参数,建立了能同时检测3种病害的多重聚合酶链式反应(Multiplex polymerase chain reaction,mPCR)体系。结果表明,多重PCR能分别扩增出长度为461,364,265 bp的特异性目的条带,能同时检测3种病原菌DNA的最低检出限为1.01 ng/μL,该多重PCR检测体系反应准确、快速、高效,为同时检测以上3种烟草病害提供了新的方法,对烟草复合侵染病害的诊断和防治提供了重要的指导作用。

摘要：为了对不同来源的烟草黑胫病菌(Phytophora nicotianae)进行快速鉴定,设计并合成了一对特异性引物ITS8-1/ITS8-2,并与已经报道的特异性引物Pn1/Pn2和SP/AP对来自22个不同采样点烟草黑胫病菌DNA进行PCR扩增对比。结果发现特异性引物Pn1/Pn2和SP/AP对部分菌株不能扩增或扩增的条带较弱,而特异性引ITS8-1/ITS8-2则能扩增所有的供试菌株且扩增条带清晰,这表明该引物的特异性强于其他2对。用其他根茎病害病菌基因组DNA、烟草黑胫病组织和病土验证发现,引物ITS8-1/ITS8-2只能对烟草黑胫病菌、病组织、病土扩增出1条364 bp的特异性条带,与报道的***序列同源性为100%。证明该引物可适用于不同来源烟草黑胫病菌的鉴定、不同地点烟草黑胫病害的诊断。

摘要：番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)寄主广泛,危害多种作物,近年发现侵染烟草引起严重经济损失。研究该病毒的分子检测方法,对健康烟草种苗培育和指导病害防控具有重要意义。本文根据TSWV核壳体蛋白基因(N基因)序列设计引物,用RT-PCR方法对采于云南疑似番茄斑萎病毒症状的5个烟草病害标样(102,514,自10,自16,自58)进行检测,PCR产物连接pMD载体并测序。测序结果表明:这5种烟草病害分离物与已报道TSWV N基因核酸序列相似性大于97.04%,所编码氨基酸序列的相似性达97.67%以上。这说明获得的5种病毒分离物均属于TSWV。本研究建立了侵染云南烟草的番茄斑萎病毒(TSWV)的RT-PCR检测方法。