摘要：目的:对准确分离植物内生真菌的方法和适宜的培养条件进行研究。方法:采用75%乙醇、次氯酸钠溶液(活性氯含量1.3%～5.2%)浸泡和无菌水洗涤工艺对植物材料进行表面灭菌,以灭菌强度逐步递减的方式,确定最佳分离植物内生真菌的表面灭菌强度;设置超净工作台无菌状态检测对照、漂洗液无菌检测对照和组织印迹无菌检测对照3种对照处理,确保适度的表面灭菌强度;采用不同的培养基分离培养内生真菌。结果:高浓度杀菌剂短时间处理比低浓度杀菌剂长时间处理更适合植物内生真菌的分离;使用10%马铃薯葡萄糖双抗培养基、22℃低温培养,能抑制快生型菌株的疯长,从而使慢生型菌株拥有一定的生长空间,最大限度地分离所有植物内生真菌;同时设置3种对照处理可以确保植物内生真菌分离的准确性。结论:设计合适的表面灭菌方法、表面灭菌效果检测方法和分离培养方法对植物内生真菌的分离至关重要。

摘要：为开发烟草疫霉的SSR分子标记,利用MISA软件搜索烟草疫霉基因组序列中的SSR位点,共发现1311个SSR位点,优势SSR位点为二核苷酸和三核苷酸,分别占总SSR位点的56.45%和39.36%;根据分析到的SSR位点使用Primer 5.0软件设计48对SSR引物,以7株烟草疫霉的DNA为模板对这些引物进行筛选,共获得扩增条带清晰且具有多态性的SSR引物20对,然后使用其中的6对SSR对32株烟草疫霉进行UPGMA聚类分析,遗传相似系数在0.60~1.00之间,在相似系数0.70水平上,可将其划分为3个类群,类群Ⅰ包含29个菌株,类群Ⅱ包含1个菌株,类群Ⅲ包含2个菌株,显示出较低的遗传分化水平。这些SSR引物的开发将为研究我国烟草疫霉的遗传多样性、群体遗传结构以及遗传图谱构建等奠定基础。