摘要：采集疑似心包积水-包涵体肝炎综合征(HPS-IBH)病鸡肝脏、肺脏、脾脏、法氏囊等病料,采用针对禽腺病毒(FAdV)的Fiber基因及传染性法氏囊病病毒(IBDV)的vVP2、VP1-b基因设计特异引物进行病毒的PCR检测以及基因序列测定与分析,并对病变肝脏组织进行组织病理学观察。结果:分别在肝脏、脾脏、肺脏组织中扩增出FAdV-Fiber基因的目的条带,在法氏囊和脾脏组织中扩增出IBDV-vVP2、-VP1-b基因的目的条带;经测序分析,该病例中FAdV属于Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4),IBDV属于基因重排病毒;病变肝脏组织H-E染色观察显示,肝细胞核内有典型的嗜碱性包涵体。综合分析,确诊该HPS-IBH病例是由于鸡群感染IBDV后继发感染FAdV-4所致。

摘要：为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测均为阴性,表明所获得的纯化蛋白具有高度的特异性;对免疫了IBD灭活疫苗,IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡群进行抗体检测,结果均能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势。本研究表明利用该原核表达系统所表达的3个蛋白均具有良好的免疫反应活性,为IBDV特异性抗体的检测和新型亚单位疫苗的研发奠定基础。