摘要：膝关节周围截骨包括胫骨近端内侧开放截骨、胫骨近端外侧闭合截骨、股骨远端外侧开放截骨、股骨远端内侧开放截骨以及双部位截骨等。截骨术通过矫正下肢力线使膝关节压力重新分布,可有效延缓膝关节骨关节炎进展。目前有三种方法用于确定术中截骨撑开的角度,包括预钻孔法、楔形填充块法和角度引导连杆法。冠状面的精准性采用髋-膝-踝角、胫骨近端内侧机械角以及下肢负重力线比率进行评估,矢状面的精准性采用胫骨后倾角进行评估。个体化截骨导板可提高截骨精准性,其制备过程包括:(1)将双下肢低剂量CT数据以DICOM格式导至重建软件,建立双下肢3D模型;(2)通过阈值分割确定截骨平面以及撑开角度,导入钢板模型,确定每个螺钉的长度以及位置;(3)基于融合沉积建模原理将混合物通过喷嘴逐层沉积材料,建立三维物体。膝关节周围截骨中使用个体化截骨导板不仅能提高手术精准性,还能降低术中透视次数和并发症发生率,手术效率及术后康复等方面均优于传统手术。膝关节周围截骨的常见并发症为术中骨折、血肿、感染。随着新材料的不断升级以及设计理念的改良,个体化截骨导板的精准度和效率将会进一步提高。未来的研究将致力于提高导板设计的个性化程度和简化制造流程。

摘要：高压电力电缆在城区越来越广泛的使用,电缆截面也在不断的增大,对电缆弯曲半径设计提出更严格的要求,电缆敷设后在运行过程中受温度影响,若不满足最小弯曲半径,会缩减电缆的使用寿命,事故频发,给国民经济带来重大损失。设计中直接使用允许最小弯曲半径R0制作工井内电缆伸缩弧,存在一定误区,本文通过算例,探讨弯曲半径与工井尺寸、工井间距离的关系,整理分析,进行释义。

摘要：锌指蛋白是最大的DNA结合蛋白 ,它能和DNA进行特异性识别 ,是研究蛋白—DNA相互作用的理想对象。改变锌指元件上的几个保守的氨基酸位点可设计筛选出序列特异的全新锌指蛋白 ,计算机在锌指蛋白设计方面的应用 ,使得全新的锌指蛋白识别特异性明显增强。这在基因治疗等方面 ,具有广阔的应用前景。

摘要：目的检测细胞中Jun mRNA在活细胞内的定位。方法设计引物,构建融合MS2茎环结构串联重复的Jun表达载体(pcDNA3.1-Jun-MS2-48X)。转染细胞后,绿色荧光蛋白(GFP)-MS2融合蛋白可与MS2茎环串联重复结构结合,通过荧光显微镜观察GFP的细胞定位,能够间接确定Jun mRNA在细胞内的定位。结果成功构建了pcDNA3.1-Jun-MS2-48X表达载体,经荧光显微镜观察,能够看到明显的绿色荧光,并且在细胞内聚集。结论实现了在细胞内实时观察Jun mRNA,为在单细胞水平上Jun mRNA的定位提供了新的技术方法。

摘要：目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44～64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。

摘要：目的构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能。方法设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列。将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139。将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平。结果酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显。结论成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础。

摘要：选择大肠杆菌的偏爱密码子,分成18个长约60个碱基且相互配对的寡核苷酸片段,合成了可溶形式的人干细胞因子(hSCF)的cDNA。合成片段经纯化、5'-端磷酸化后,通过PCR进行合成hSCF的cDNA一次性组装与扩增,得到了含有可溶形式的hSCF的全部编码区及EcoRⅠ、SalⅠ位点在内的全长共515个碱基对的DNA片段。回收该DNA片段,酶切消化,定向克隆进质粒pUC19。经酶切鉴定以及序列测定,得到了全序列正确的克隆株,为下一步的工作奠定了基础。

摘要：目的以具有广泛助溶活性的小泛素相关修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)为辅助蛋白,利用翻译偶联,构建一种新型非融合可溶原核表达载体,实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变,去除其中的EcoRⅠ酶切位点,获得同义突变体m SUMO。通过翻译偶联Linker序列的设计、合成,构建以m SUMO蛋白为辅助蛋白的翻译偶联表达载体p TIG-m SUMO。PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白RA的基因,将其克隆至p TIG-m SUMO中,获得表达载体p TIG-m SUMO/RA,实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果 IPTG诱导蛋白表达以后,SDSPAGE和Western印迹检测证实,目的蛋白RA的表达量明显增加,且可溶比例约占50%。结论以优化后的SUMO为辅助蛋白,成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体p TIG-m SUMO,实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达,既提高了表达水平,也提高了可溶性。p TIG-m SUMO作为一种可溶的非融合表达载体,在实现外源蛋白的高效可溶表达方面,很可能具有一定的普遍性。

摘要：本研究针对大直径薄壁零件的加工工艺及参数选择进行了深入研究,旨在提高加工效率和质量。通过分析大直径薄壁零件的特点和加工挑战,我们研究了数控车床的基本原理和结构,以及数控编程、刀具路径规划和切削参数优化等关键技术。在材料选择和工艺流程设计方面,我们考虑了材料性能和加工要求,以及合理确定工艺流程的重要性。同时,我们深入探讨了刀具选择和切削参数优化的策略,以及加工精度控制和表面质量改进的关键因素。通过实验研究和结果分析,我们验证了所提出的工艺优化方法的有效性和可行性。

摘要：为了构建一种可用于串联共表达多个基因的原核表达载体,通过PCR引入点突变,对商业载体pET-22b的酶切位点进行定向改造,设计独特的XbaⅠ/SpeⅠ模块。获得改造成功的载体pET-m22b,测序结果显示启动子、核糖体结合位点、多克隆位点及终止子均位于XbaⅠ和SpeⅠ两酶切位点间。选取不同来源的基因进行串联组合及表达鉴定,四个基因成功组合于同一载体中,表达效果良好,各基因表达效率不受明显影响。研究构建的载体pET-m22b,使多基因的共表达更加便捷,为蛋白复合物的表达与纯化、代谢通路的异源重建及其优化等研究奠定了良好的基础。