摘要：目的构建虎杖查耳酮合酶(Pc CHS1)基因的RNA干涉(RNAi)表达载体,获得Pc CHS1表达下调的转基因虎杖植株。方法根据Gen Bank中已知的Pc CHS1基因序列(EF090604),设计相应引物,克隆Pc CHS1基因核心保守序列。以Pc CHS1基因为靶基因,将长度574 bp保守序列片段通过正、反2个方向插入表达载体p YLRNAi中,构建RNAi表达载体p YLRNAi-Pc CHS1。通过根癌农杆菌介导法将其导入虎杖茎尖组织。对获得的转基因植株,利用Northern blotting检测Pc CHS1基因表达水平,并应用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇苷的量。结果成功构建Pc CHS1基因RNA干涉表达载体,获得了5株转Pc CHS1基因干涉载体的阳性植株。转基因虎杖Pc CHS1基因表达水平显著下调,并且转基因植株中白藜芦醇苷量均得到显著提高,其中最高量是对照植株的3.8倍(P<0.05)。结论成功获得了干涉Pc CHS1基因表达下调的转化植株,抑制Pc CHS1基因的表达显著增加了转基因虎杖中白藜芦醇苷的量,为有效利用该基因提高虎杖白藜芦醇苷量奠定基础。

摘要：目的:探索利用Excel软件统计函数进行X2检验。方法:建立格式化的电子表格,利用Excel软件统计函数CHITEST、CHIINV、CHIDIST进行X2检验运算。结果与结论:利用Excel软件统计函数可实现格式化X2检验,且一旦格式固定,只要替换其中数值,就可立即得到X2值。

摘要：设计单室模型间歇静脉滴注给药方案。方法:根据药动学参数,用Excel编写程序。结果:输入t1/2、Vd、有效治疗范围等,可计算出给药时间间隔、滴注速度(k0),而且可绘制药-时曲线。结论:该方法适用于任何一种符合单室模型间歇静脉滴注给药特征的药物,可迅速得到所有结果,且简单、可靠、直观。

摘要：目的确定适合何首乌RAPD-PCR的基因组DNA提取方法及最适宜反应体系。方法通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA,研究其用于RAPD-PCR的可行性。利用正交设计方法L16(45),针对Tag酶,引物,dNTP,镁离子,模板设计了5因素4水平的正交实验,优化RAPD-PCR反应体系。结果正交设计结果表明,可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合。根据实际需求,最适宜的RAPD-PCR反应体系为20μl,其中1×PCRbuffer,Tag酶1U,引物1μmol/L,镁离子2mmol/L,dNTP300μmol/L,模板40ng。结论改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD遗传多样性分析。

摘要：根据GenBank公布的蛇类物种线粒体基因序列和已知的引物序列,总共设计和合成了9对引物.采用保真度较高的Ex-Taq酶,以总基因组DNA为模板进行PCR扩增,产物纯化后进行TA克隆和步移测序,拼接后获得了全长17144bp银环蛇线粒体基因组全序列.其共编码13种蛋白质、2种rRNA和22种tRNA.这些基因没有内含子,基因间排列紧密,仅有极少或完全没有核苷酸,甚至相互重叠.除了含有2个调控线粒体基因组复制和转录的控制区外,其余基因在长度和位置等方面与其它脊椎动物均具有较高的同源性.

摘要：RAPD技术利用一个10碱基序列的引物,通过PCR扩增的多态性来检测受试材料基因组间的遗传变异关系。介绍了RAPD技术的基本原理及其优缺点,并根据前人的研究成果总结了RAPD技术在植物研究中的应用情况,最后展望了该项技术的一些应用前景。

摘要：利用正交实验设计的方法,对白木香ISSR-PCR(简单重复序列区间-多聚酶链式反应)反应体系中的5种主要因素(dNTP、Mg2+、模板DNA、引物和Taq酶)在4个水平上进行优化筛选,建立了白木香ISSR-PCR反应的最佳体系(25μl)为:dNTP 0.2 mmo1/L、Mg2+2.5 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA 100 ng和Taq酶1.0 U。通过梯度PCR反应得到相应引物的最佳退火温度为49.2℃。这一体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究白木香的遗传多样性提供了标准化程序。

摘要：目的　将甲型流感病毒核蛋白(NP)基因克隆到原核表达载体进行可溶性融合表达,制备纯化的病毒核蛋白,为制备甲型流感病毒单克隆抗体提供材料。方法　提取甲型流感病毒RNA ,设计引物,RT PCR扩增NP基因,利用基因工程的手段,将甲型流感病毒的NP基因在大肠埃希菌中进行融合表达,并将表达产物进行亲和层析。结果　成功构建了甲型流感病毒NP基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。结论　通过合理控制发酵时间、生长温度和诱导物浓度,制备了较为理想的可溶性甲型流感病毒核蛋白。

摘要：目的:计算机辅助设计氨基糖苷类抗生素个体化给药方案。方法:以阿米卡星为例,根据患者的性别、年龄、身高、体重、血清肌苷浓度,计算血清肌苷清除率、药物清除率和消除速率常数,以药动学模型理论和药效学原理为依据,用Excel编写模拟计算程序。结果:只需输入患者生理参数,即可输出男性和女性静脉注射、血管外给药、间歇静脉滴注3种给药方式的给药剂量和稳态血药浓度。小儿剂量可由小儿体表面积与成人体表面积之比折算而成。且因Excel具有重复计算功能,改变输入参数值,可一步得到所有结果供临床参考。该方法适用于其它氨基糖苷类抗生素。结论:根据药动学参数和患者的生理特点,可利用Excel函数设计阿米卡星个体化给药方案,该法简单、可靠、直观。

摘要：采用菝葜皂苷元作为含量监测指标 ,分别用正交设计法优化醇提工艺和大孔树脂精制工艺。最佳工艺如下 :知母 5 0 0g ,加 75 %乙醇 6倍 ,加热回流提取 3次 ,每次 6 0min ,滤过 ,合并滤液 ,浓缩至液料比为 1∶1,分别用X 5和D392大孔树脂吸附、脱色 ,洗脱液为 80 %乙醇 ,减压回收乙醇 ,真空干燥 ,得白色或类白色知母总皂苷粉末。皂苷类物质提取率达 85 %以上 ,纯度达 95 %以上 ,菝葜皂苷元含量为 30 %。