摘要：水中承台施工采用钢套箱是一种常规施工方法,但是在净空狭小的老桥下承台施工采用钢套箱则比较少见。以某市某路快速化改造工程项目为例,介绍老桥下狭小净空内钢套箱的设计及施工,对低净空下钢套箱分节位置选取、受力计算、拼装、下沉、混凝土封底等施工难题进行探索,供类似工程参考。

摘要：目的构建pSIREN-survivin/shRNA重组质粒并鉴定,为探索瘢痕疙瘩基因治疗的RNA干扰(RNAi)途径奠定基础。方法根据基因库survivin cDNA序列及Reynolds设计原则,设计并合成两端有酶切位点的65个碱基的寡核苷酸链,退火成互补双链后用T4DNA酶克隆至线性化的RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒中;转化大肠杆菌DH-5a菌株,提取质粒行酶切鉴定,测序分析。结果 PCR扩增片断出现465 bp大小的目的基因条带与预期结果相符;双酶切见约65 bp目的基因条带;插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论成功构建重组质粒pSIREN-survivin/shRNA,为下一步用脂质体转染瘢痕或肿瘤细胞的研究奠定基础。

摘要：目的观察应用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Survivin表达对细胞凋亡和细胞增殖的影响。方法设计、合成特异性抑制Survivin表达的siRNA，转染瘢痕疙瘩成纤维细胞，通过半定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Western blot检测24h和48h后成纤维细胞内Survivin mRNA和蛋白变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，噻唑蓝（MTF）测定成纤维细胞的增殖。结果重组质粒成功转染瘢痕成纤维细胞，转染效率为67．0％；阳性质粒转染24h后，Survivin mRNA和蛋白表达明显降低，抑制率分别为52．2％和54．8％（P〈0．05），48h后抑制率增至75．7％和76．7％。阳性质粒转染24h凋亡率为11．9％，48h增加至21．2％，显著高于阴性对照组和未处理组；细胞周期检测阳性质粒干扰组s期细胞减少，G2／M期所占比例增高，出现了G2／M期阻滞现象；MTF测定阳性质粒干扰组细胞生长曲线平缓。结论特异性siRNA可以有效干扰瘢痕疙瘩成纤维细胞内Survivin mRNA和蛋白的表达，诱导细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。

摘要：目的构建pSIREN-HIF-1α/shRNA重组质粒并测序鉴定,为下一步探索鼻咽癌基因治疗的RNA干扰(RNA interference,RNA)i途径奠定基础.方法根据基因库HIF-1αcDNA序列(NM_001530/NM_181054)以及Reynolds设计原则,设计并合成两端有酶切位点的60个碱基的寡核苷酸链,退火成互补双链后将退火产物与RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体链接后,热转化至大肠杆菌JM109菌株中,提取质粒进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,测序分析.结果 PCR扩增片段出现约470 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符;凝胶电泳证实重组载体构建成功,插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致.结论成功构建重组质粒pSIREN-HIF-1α/shRNA,为下一步用脂质体包装并转染鼻咽癌细胞的研究奠定基础.