摘要：以美洲南瓜(Cucurbita pepo)幼叶为材料,采用Trizol方法进行总RNA的提取。根据GenBank上已提交的黄瓜WRKY4基因序列保守区域设计特异性引物,扩增得到1条长度为497bp的WRKY4转录因子基因片段,利用已知中间序列,通过RT-PCR和RACE(rapid amplification cDNA ends)等技术,克隆得到美洲南瓜WRKY4的cDNA全长序列,长度为1722bp,5'非翻译区为185bp,3'非翻译区为118bp,开放阅读框为1419bp,编码472个氨基酸,分子量约为51.40kD,等电点约为8.36,GenBank登录号为JX096811。用Blast和DNAMAN软件对其核苷酸序列进行分析,结果显示,美洲南瓜WRKY4与黄瓜WRKY4同源性达到87%。美洲南瓜WRKY4基因克隆及序列分析为以后研究此基因的功能奠定了基础。

摘要：NAC转录因子是特异存在于植物中具有多种生物功能的新型转录因子,其家族成员N端含有保守氨基酸序列,C端为高度变异的转录激活区。本研究以南瓜叶片为材料,根据甘蓝型油菜NAC1、番茄NAC、辣椒NAC保守结构域设计1对简并引物,采用RT-PCR方法扩增得出长度约为440bp大小的DNA片段,将其克隆至pMDl9-T载体上,而后对重组克隆进行测序,用BLAST和DN AMAN软件对核酸及氨基酸序列进行分析,结果表明所获得的南瓜NAC基因片段由442个碱基组成,编码147个氨基酸,命名为CmNAC。该基因片段具有其他植物NAC基因中存在的保守区,并且属于NAC家族中ATAF1/2亚家族。

摘要：根据烟草和大麦中反转录转座子Bare-1和Tto1的LTR保守区域设计引物,对14份茄子材料进行PCR扩增,分别采用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物,建立了茄子IRAP(inter-retrotransposon amplifiedpolym orphism)和REMAP(retrotransposon-microsatellite amplified polymorphism)分子标记技术体系。两种方法均得到了多态性丰富的指纹图谱,为茄子品种鉴定和指纹图谱构建提供了新途径。

摘要：本研究采用SYBR Green染料的茎环q RT-PCR方法,以mi R159和mi R172为例,利用番茄叶片的总RNA作为模板,设计mi RNA的茎环引物、特异上游引物、通用下游引物,使用茎环荧光定量PCR法定量检测mi RNA表达量在番茄中的可行性。通过分析扩增曲线、熔解曲线,制作标准曲线,以及对PCR产物的克隆测序,结果表明该方法可以用于番茄mi RNA的定量检测,并且具敏感性高、特异性好、操作简单、节约成本、模板用量少的优点。Trizol法和试剂盒法提取的总RNA在后续实验中几乎没有差异,但Trizol法更为经济,有效率。Mi RNAs在植物的生长发育过程中起着重要的作用,本研究为番茄mi RNA的深入研究奠定了基础。

摘要：以番茄苗为实验材料,克隆出番茄WRKY转录因子的一个基因片段并对其核酸序列进行分析。根据笔者课题组已经克隆出的番茄特异的WRKY基因片段和番茄EST序列设计特异引物,利用RT-PCR技术获得番茄WRKY转录因子的一个基因片段并连接到pMD19-T载体中,转化DH5α,筛选阳性克隆,用双酶切分析法对其进行鉴定并进一步对核酸序列进行测序分析。结果表明,克隆获得的WRKY转录因子基因片段约为680 bp,用GenBank中的Blastn程序分析表明,其与CaWRKY(AY789641.1)、WIZZ(wizz mRNA)(AB028022.1)的相似性分别为86%和84%。WRKY转录因子在番茄中同样受JA诱导,这为克隆番茄WRKY基因全长,进而为番茄抗病育种奠定基础。

摘要：参考马铃薯和烟草的反转录转座子LTRs保守区域设计引物,对34份茄子材料进行PCR扩增,得到了多态性丰富的指纹图谱。聚类分析将34份茄子材料分为三大类群,表明IRAP分子标记适合于茄子种质资源的亲缘关系分析。

摘要：克隆茄子转录因子SmWRKY1基因,对其序列进行分析,为SmWRKY1基因在茄子抗逆分子育种的应用中提供理论依据。以茄子幼苗为试材,依据GenBank上已提交的番茄、甜椒、烟草的WRKY基因序列设计引物,提取总RNA利用RT-PCR方法扩增得到基因片段,克隆、测序并通过NCBI在线和DNAMAN等软件对其核酸及氨基酸序列进行分析。同源克隆得到SmWRKY1,核酸序列930 bp,翻译为310个氨基酸组成的蛋白序列,其中Ser和Thr量最多,分别占总氨基酸数的12.0%和11.0%。NCBI检索SmWRKY1属于WRKY基因超家族,第114至120个氨基酸含有WRKY保守结构域"WRKYGQK",其锌指结构为C2H2型,初步证实SmWRKY1属于第二大类WRKY转录因子。DNAMAN构建茄子SmWRKY1与不同植物WRKY蛋白的系统发育树,表明茄子WRKY1与番茄中的WRKY1蛋白亲缘关系最近,同源性达96%。WRKY基因在植物耐逆性的研究中有着重要的作用,通过克隆出SmWRKY1基因片段,为进一步克隆其全长、研究其功能做前期准备,为分子育种、培育茄子耐逆性新品种奠定了一定的基础。

摘要：WRKY转录因子在植物应对生物或非生物胁迫的反应及生长和发育中起重要作用,为研究WRKY转录因子在番茄中的功能,本研究根据课题组已经克隆的番茄WRKY转录因子片段设计引物,采用RT-PCR方法,从JA诱导的番茄幼苗中,获得了608bp的cDNA片段。序列分析表明,该序列含有WRKYGQK保守结构域,与Capsicum annuum WRKY-c序列相似性是79%,与Nicotiana tabacum NtWRKY-7序列相似性是74%,表明已经成功克隆了番茄WRKY2基因片段。

摘要：用CTAB法提取三七景天基因组DNA,根据已报道的辣椒WRKY的转录因子保守区域设计引物,对影响PCR扩增反应的主要因素进行初步研究,建立景天基于转录因子的分子标记技术体系。在20μl的反应体系中,dNTPs0.4mmol/L,DNA模板30ng。扩增程序为:94℃预变4min,反应前7个循环在94℃30s、60℃30s、72℃1min条件下进行,随后5个循环在94℃30s、60℃30s、72℃45s条件下进行,随后13个循环在94℃30s、48℃30s、72℃1min、94℃30s、40℃30s、72℃1min条件下进行,最后72℃延伸10min。

摘要：IRAP(inter-retrotransposon amplified polymorphism)是一种基于反转录转座子的分子标记技术。文章参考烟草中的反转录转座子Tnt1的LTR保守区域设计引物,对32个百合品种进行IRAP扩增,共扩增出163条多态性带,每个品种的扩增位点数介于0～8之间,据构建的指纹图谱可将供试百合品种完全区分开。