摘要：由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法。肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段。因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19cfu/mL。

摘要：根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从而使检测结果往往出现很高的假阳性。本试验利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测金黄色葡萄球菌活菌的EMA-PCR方法,较传统PCR大大提高了检测的准确性和可靠性,该方法检测灵敏度可达15CFU/mL。

摘要：幼师专业的美术教学是向学生进行美育的重要手段之一，是贯彻国家教育方针，培养学生成为德、智、体、美全面发展的合格幼儿教师的重要组成部分。然而，幼师生的组成多为初中毕业15—16岁女生，进入幼师时往往缺乏一定的美术基础知识，即便有简单的绘画能力也起不了决定作用，更难谈学生有过绘画功底。因为现在专业艺术学校大规模的扩招和艺术高中的兴办，客观使本应有“琴棋书画”等技能的幼师整体艺术素质下滑。

摘要：为了快速检测养殖场环境中链球菌的污染情况,试验利用链球菌胞外蛋白因子核苷酸特异序列设计引物,建立养殖场环境中链球菌的PCR快速检测方法。结果表明:从链球菌标准阳性株中获得大小为197 bp的特异性目的片段,而肠毒性大肠杆菌、沙门杆菌、金黄色葡萄球菌等均不能检出;10倍系列稀释结果显示该方法敏感性可达到单个菌株;在处理环境样品时,能检测到4×103cfu/g的环境链球菌。说明该方法具有简单、快速、准确的特点,大大缩短了检测环境中致病性猪链球菌的时间。

摘要：根据沙门氏菌保守的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)基因序列设计特异性引物,对实验菌株进行PCR检测,结果只有沙门氏菌能扩增出大小为285bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。本研究利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测沙门氏菌活菌的EMA-PCR方法,从而避免了因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果。该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性和真实性,检测灵敏度可达11CFU/ml。

摘要：肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。

摘要：根据溶菌酶释放蛋白的编码序列特点设计引物,以建立养殖场环境中链球菌的PCR快速检测方法。结果在链球菌参考株都扩增到885 bp特异性目的片段,而肠毒素性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等均不能检出;10倍系列稀释结果显示,本方法敏感性可达到检测单个菌株;对处理环境样品时,能检测到4×103CFU/g的环境链球菌。该方法具有简单、快速、准确的特点,大大缩短了检测环境中致病性猪链球菌的时间。