摘要：目的:设计并构建针对人caspase-8基因mRNA的siRNA表达载体,观察其对转染细胞中的caspase-8的抑制作用。方法:化学合成用于产生针对caspase-8的发夹状的RNA的寡核苷酸,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入经HindIII和BglII双酶切后的pSUPER真核表达载体。对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体介导,把重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,RT-PCR、间接免疫荧光检测其对mRNA和蛋白表达的干涉效果。结果:构建了针对人caspase-8基因的RNA干涉真核表达载体pSUPER-C1和pSU-PER-C2,并在人HeLa细胞中有效发挥了对caspase-8基因的干涉作用,而且pSUPER-C1对于caspase-8基因的抑制作用要优于pSUPER-C2。结论:成功地构建了针对人caspase-8基因的siRNA载体,转染HeLa细胞后可抑制caspase-8基因的表达。

摘要：目的探讨miR-193b对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测高转移细胞系SW620、低转移细胞系中SW480 miR-193b的表达,同时设计miR-193b siRNA及miR-193b利用脂质体2000转染入细胞内,并通过RT-PCR检测其转染效率,利用体外划痕及Transwell实验验证转染miR-193b siRNA及miR-193b后对肿瘤细胞的侵袭转移能力的影响,利用Western印迹验证miR-193b对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响。结果 RT-PCR结果显示miR-193b在高转移细胞系SW620中表达水平显著低于转移细胞系SW480;RT-PCR检测转染效率的结果显示转染miR-193b-siRNA的SW480细胞中miR-193b的表达较对照显著降低,而在转染mimic-miR-193b的SW620细胞中其表达水平明显升高;体外划痕实验结果显示SW480-miR-193b-siRNA细胞体外迁移能力显著升高,而在转染mimic-miR-193b的SW620细胞中其迁移能力较对照组显著降低;Transwell小室结果显示体外细胞侵袭及迁移实验中过表达miR-193b均可明显抑制SW620细胞的侵袭转移能力,而抑制miR-193b的表达可显著增加SW480侵袭转移潜能;Western印迹显示过表达miR-193b可显著降低SW620细胞中uPA蛋白的表达,抑制miR-193b可明显提高SW480中uPA蛋白的表达水平。结论 miR-193b通过下调uPA可抑制结肠癌细胞的侵袭和转移。

摘要：[目的]研究大豆异黄酮对低压间歇缺氧大鼠学习记忆能力和脂质过氧化的影响,评价大豆异黄酮对低压间歇缺氧的保护作用。[方法]采用析因设计,设置地面和7 500 m缺氧两大组,地面和缺氧各再均分5组(对照组,雌二醇组,大豆异黄酮高、中、低剂量组),每个组随机设大鼠8只,雌雄各半;缺氧组采用小动物低压氧舱模拟7 500 m环境,间断缺氧,持续15 d,地面组正常饲养;试验期间,各组大鼠分别灌胃相应的药物,每天一次。给药结束时进行水迷宫实验,并取大鼠血清测定SOD活力和MDA含量。[结果]缺氧和给药2个因素间无交互作用;缺氧组水迷宫空间搜索实验中目标象限时间,平台停留时间较地面组短,经过平台次数较地面组少,同时缺氧组SOD活力较地面组增高,MDA含量较地面组增加;缺氧组给予雌二醇和不同剂量的大豆异黄酮可不同程度地提高SOD活力,降低MDA含量。[结论]低压间歇缺氧加速了大鼠体内酯质过氧化,损害了大鼠的学习记忆能力,而大豆异黄酮能改善缺氧大鼠的脂质过氧化水平,提高学习记忆能力,对低压间歇缺氧具有一定的保护作用。