摘要：牛肠道病毒（Bovine enterovirus,BEV）是2011年在我国部分牛场新发现的一种消化道病毒病病原,因此亟需建立针对BEV快速、有效的检测方法。本研究根据BEV 3D基因保守序列,设计并合成一对特异性引物,建立了检测BEV的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法。该方法与引起牛的病毒性腹泻的其它几种牛的病毒均无交叉反应,检出敏感度达7.13×10^1拷贝/μL,比常规RT-PCR检测方法高10倍。应用该方法检测了3个规模化奶牛场送检的41份奶牛腹泻样本和3份气溶胶样本,腹泻样品阳性检出率为39.02%（16/41）;3份气溶胶样本均为阳性,表明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测大量临床样本,本方法为BEV的早期快速诊断和定量分析提供了技术支撑。

摘要：针对牛冠状病毒(BCoV)N基因保守序列设计合成了1对特异性引物,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了检测BCoV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。在1个反应体系中模板最低检测限为7.8 copies/μL,比普通RT-PCR更加灵敏;与牛主要消化道和呼吸道病毒病病原均无交叉反应;批内、批间重复变异系数均低于1.5%;应用定量PCR检测了39份疑似临床病料,阳性检出率为51.28%(20/39),普通RT-PCR为41.03%(16/39)。结果表明,该方法特异性强、稳定性好、准确率高,本方法将为BCoV的临床诊断和流行病学调查提供技术保障。

摘要：目的建立口蹄疫流行株不同血清型RT—PCR的鉴别诊断技术，为有效防控口蹄疫提供技术支撑。方法根据GenBank中的A型、0型、Asial型口蹄疫病毒的全基因组核酸序列，用Primer5．0设计该3型口蹄疫病毒的通用引物及特异性分型引物，建立RT—PCR方法，采用1％琼脂糖凝胶电泳结合测序技术对引物的特异性和广谱性进行分析。结果1％琼脂糖电泳结果表明通用引物P1／P2能同时特异性扩增A、O、Asial型口蹄疫病毒，扩增片段大小为457bp，与预期值相一致。A、O、Asial型分型引物只能扩增相应亚型口蹄疫病毒的目的基因片段（大小分别为320、240和460bp），与预期值相一致。不能扩增其他2种亚型。Blast比对显示分型引物扩增产物序列经测序验证与其亚型完全对应，同源性为84％～99％。结论建立的RT—PCR诊断技术对口蹄疫病毒通用型扩增具有广谱性，对基因亚型分型具有特异性，可用于口蹄疫病检测及其流行病学调查。