摘要：目的克隆并测定嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统部分编码基因GspF和Gsp E的完整基因序列。方法分别根据已获得的嗜麦芽寡养单胞菌D2株部分序列,以及GenBank收录的K279a和R551株的序列依次设计3组引物,移步法PCR扩增GspF和E基因,产物纯化后连接pMD18T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后进行测序分析,将获得各PCR片段进行拼接,最终获得GspF和E基因的完整编码基因,并在GenBank中进行对比分析。结果 PCR先后扩增获得的3段序列,测序并拼接后发现其含有两个完整开放读码框架,分别为长1200 bp的GspF基因(GenBank收录号为GU377212.1)和长1434 bp的GspE基因(GenBank收录号为HM151387)。在GenBank中BLAST分析发现,D2株与嗜麦芽寡养单胞菌R551-3菌株的GspF基因及氨基酸序列同源性分别为93%和98%;GspE基因及氨基酸序列同源性与同菌种菌分别为92%和99%。结论成功克隆出嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统基因簇中的GspF和GspE完整编码序列;嗜麦芽寡养单胞菌GspF和GspE种内高度保守,而其他细菌差异显著,提示其Ⅱ型分泌机制可能与其他革兰阴性菌有一定差异。

摘要：构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株荧光素样单加氧酶基因表达克隆载体,并进行融合表达。PCR扩增出嗜麦芽寡养单胞菌D2菌株基因组DNA中包含单加氧酶基因约1300bp的核酸片段,将其克隆到T载体pMD-18中进行序列测定,所得序列申请并获得GenBank登记号（GQ122330）。DNA star软件分析发现该基因片段中含有一个996bp的完整开放读码框架（ORF）,与GenBank中收录的*** R551-3（CP001111/GenomeProject17107）和K279a（AM743169）的MO基因核酸序列同源性分别为90%和89%,氨基酸序列同源性分别为93%和90%。根据该ORF序列设计分别含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的表达克隆扩增引物,PCR扩增、双酶切后将产物亚克隆到pET32a载体中,经过双酶切验证,证实成功获得了表达重组载体pET32a/MO;将其转化宿主菌*** BL21,IPTG诱导后成功表达出54.2ku的MO融合蛋白,为该酶进一步的功能研究和开发奠定了基础。

摘要：根据统计数据显示,2021届本科毕业生高达909万人,同比增长35万。毕业人数屡创新高,就业形势不容乐观。截至2021年4月份,预计今年毕业生就业率约为96%,相比去年下降2个百分点。但是,将近八成的毕业生对现有工作不是很满意,将近六成的用人单位表示毕业生社会实践少,只学到了书本中的知识等问题。本文基于以上问题设计大学生职业生涯规划APP,可以让学生清楚了解自己的学习现状,认识到职业生涯规划的重要性,让学生积极主动地对自己的大学生涯进行规划管理。也可以为学生提供专业的职业生涯规划指导,增强学生的社会实践能力和专业知识能力。在增加就业率的同时,提高就业满意度,缓解应届生的就业烦恼,避免毕业时能力不足的尴尬。