摘要：目的:应用麦胚无细胞表达系统(Wheat Germ Cell-Free System),表达及纯化恶性疟原虫环子孢子蛋白(Circumsporozo-ite protein,CSP),以便用于免疫学评价。方法:根据从PlasmoDB检索获得的恶性疟原虫CSP基因序列,设计一对特异引物,以从ATCC获得的恶性疟原虫3D7基因组质粒(P.f.3D7 genomic DNA)为模板,经PCR反应扩增目的片段。PCR产物经NcoI与Sma I双酶切后,与经过同样酶切的pIVEX 1.3WG载体连接,随后转化大肠杆菌DH5а,经筛选获得pIVEX WG1.3-CSP重组质粒。将该重组质粒加入到麦胚表达试剂盒并按照说明书进行表达,表达产物经亲和层析柱纯化,最终获得CSP蛋白。结果:PCR反应成功扩增CSP基因序列,并成功构建pIVEX WG1.3-CSP重组质粒;经WB试验证明,麦胚无细胞表达系统可成功表达并纯化CSP蛋白。结论:麦胚无细胞表达系统可高效表达恶性疟原虫CSP,为CSP用于后续的诊断试剂和疫苗评价方面的研究打下了坚实的基础。

摘要：目的建立一种快速、灵敏的人3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）方法。方法根据GeneBank数据库中提供的人GAPDH基因（NC000012）mRNA序列,在其保守区域设计一对用于RT-PCR引物,通过优化反应体系和反应条件,成功建立了检测人GAPDH基因的SYBR Green RT-PCR方法。结果实验结果表明,该检测方法检测人GAPDH基因的最低检测拷贝数可达到15copies/μL,在一个较宽的浓度范围内（1.5×1011.5×107）具有良好的线性关系（r=0.992）。溶解曲线呈现了清晰的单一峰型,Tm值为（84.5±0.2）℃。结论该研究为人GAPDH基因作为内参基因进行人功能基因与病原基因表达的定量分析提供了一种更为快速、灵敏的方法。

摘要：目的:优化八味伤科活血片的提取工艺,并测定三七皂苷R1的含量。方法:以干浸膏收得率与总黄酮含量为指标,正交设计优选八味伤科活血片的提取工艺;采用HPLC检测八味伤科活血片中三七皂苷R1的含量。结果:最佳提取工艺为10倍量的水加热提取2次,每次1.5 h。三七皂苷R1在0.388 mg/mL^3.880 mg/mL范围内线性关系良好,加样回收率(n=6)为93.16%,RSD为1.2%。结论:优选的工艺条件和HPLC含量测定方法,准确、可靠,重现性好,可用于八味伤科活血片的提取和质量控制。

摘要：目的:优选脑脉醒神胶囊的最佳提取工艺。方法:以大黄总蒽醌含量作为评价指标,采用单因素和正交试验法优选脑脉醒神胶囊中大黄的醇提取工艺;以苦杏仁苷提取率和干浸膏得率作为评价指标,选取加水量、提取时间、提取次数为考察因素,采用单因素试验法优选脑脉醒神胶囊中桃仁等的水提取工艺。结果:优选的最佳醇提工艺为药材加6倍量70%的乙醇,回流提取3次,每次30 min;水提工艺最优方案为药材加8倍量的水,煎煮2次,每次1 h。结论:优选的提取工艺设计合理,结果稳定可行。