摘要：选择NDV融合蛋白保守的编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCR法 ,通过检测NDV感染的实验室病料和临床病料。结果表明 ,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约 0 .3pg的NDVRNA ,攻毒后第 8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出NDV ,第 8天非免疫鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为 5 / 10 ,第 8天SPF鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为 6/ 10。对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中NDV最佳检出时间均在攻毒后第 5天。逆转录套式PCR方法对临床样品中NDV的最大检出率为 6/ 7。经核酸杂交验证 ,该法具有很高的特异性和敏感性 ,也比较简便快速 ,为从分子水平探讨NDV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。

摘要：依据文献报道的鸭瘟病毒 (DPV)的核苷酸序列 ,设计和合成了二对引物 ,分别为SP1和SP2 ,LP1和LP2。北京株鸭瘟病毒于鸭胚中增殖 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化 ,按酚 氯仿法抽提DNA。然后以DPVDNA为模板进行PCR ,分别扩散增出与理论相符的 42 1bp和 1 2 0 9bp的二个DNA片段 ,并将它们克隆于质粒pGEM TEasy中。经酶切和质粒PCR ,筛选含有目的基因的重组质粒。重组质粒以步移法从双方向测序 ,获 1 586bp的核苷酸序列。研究发现这 1 586bp的核苷酸序列与文献报道的UL6和UL7基因序列的同源性为 99% ,仅有一个碱基的差异。进一步作氨基酸分析 ,发现这个碱基所引起的变异为无意义突变 (CCT→CCC)。结果表明 。

摘要：选择鸡传染性喉气管炎病毒保守TK基因的蛋白编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测鸡传染性喉气管炎病毒DNA的套式PCR法。通过检测ILTV感染的鸡胚绒毛尿囊膜、实验室病料和临床病料 ,结果表明 ,套式PCR法能检测出ILTV感染后的非免疫鸡胚和SPF鸡胚绒毛尿囊膜研磨液中的被稀释了10 5倍的病毒 (约 1fg的ILTVDNA) ,攻毒后第 10天还能从非免疫鸡和SPF鸡气管拭子中检出ILTV ,第 10天非免疫鸡气管拭子中ILTV的最大检出率为 7/ 10 ,第 10天SPF鸡气管拭子中ILTV的最大检出率为 8/ 10。对非免疫鸡和SPF鸡的气管拭子中ILTV最佳检出时间均在攻毒后第 5天。对临床样品中的ILTV的最大检出率为 7/ 7。经过核酸杂交验证 ,套式PCR法具有很高的特异性和敏感性 ,为从分子水平探讨ILTV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。

摘要：目的　克隆禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMⅢ / 99(H9N2 )纤突蛋白血凝素基因和神经氨酸酶基因 ,并与同一亚型不同毒株的病毒进行比较。方法　本研究以自行设计的引物 ,一次性成功地扩增出KMⅢ毒株HA和NA全长基因cD NA ,并将它们克隆和测序。以获得的核苷酸序列和氨基酸序列与其它毒株的HA蛋白和NA蛋白比较。结果　HA基因由16 83bp组成 ,编码 5 6 0个氨基酸 ;NA全基因为 14 0 7bp、编码 4 6 9个氨基酸残基 ;HA1羧基端的氨基酸组成是 :R -S -S -R ,符合低致病力毒株的分子特征。它们的氨基酸组成虽有差异 ,但与血凝素和神经氨酸酶功能关系密切的氨基酸残基却高度保守。联机检索表明 ,KMⅢ的HA基因cDNA与其它H9N2亚型HA基因最大同源性在 82 %～ 96 %之间。NA基因cDNA与其它H9N2亚型NA基因的最大同源性在 88%～ 97%之间。结论　我们首次克隆和测序了KMⅢ毒株的HA基因和NA基因 。

摘要：本研究选取有代表意义的9株鸡传染性支气管炎病毒（IBV）国内分离株．利用所设计的一对特异引物，通过RT—PCR的方法成功地扩增了膜蛋白基因即M基因全长片段．通过克隆、序列测定获得了9个分离毒株M基因的全长核苷酸序列。并将各IBV国内分离株与GenBank中注册的一些毒株的M基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比较、系统进化关系分析发现：IBV中国地方分离毒株大部分属于Mass型；不同毒株间存着重组、缺失、插入及点突变等变异，从ATG至第150bp区段的核苷酸序列变异频率最高；IBV中国地方分离株M基因的变异属于高频率的同义突变；国内的IBV分离株分为两个基因群，1群分离毒株与GenBank中Mass型的毒株亲缘关系较近．毒株间核苷酸序列同源性为95．7%～100％，其相应的氨基酸序列同源性为98．2%～100%；Ⅱ群分离毒株与众多参考毒株的亲缘关系都比较远，毒株间彼此核苷酸序列同源性为89．7％～91．9%，氮基酸序列同源性为92．0-96．0%。

摘要：参考禽副粘病毒的融合蛋白基因 (F基固 )cDNA序列 ,设计并合成了 1对引物 ,以分离到对鹅有致病力的Ⅰ型禽副粘病毒GPMV/QY97 1株的核酸 (RNA)为模板 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)对其融合蛋白基因 3′端进行扩增 ,获得了预计的 884bp左右的片段。将该片段克隆进 pGEM TEasy质粒载体 ,获得重组质粒T GPMVF3′ ,采用限制性内切酶和PCR方法对该重组质粒进行鉴定 ,证明所克隆的片段即为目的基因片段 。

摘要：目的采用聚合酶链反应和DNA序列分析,了解沙门氏菌侵袭蛋白A(invasionproteinA,invA)基因核苷酸序列有何差异,建立沙门氏菌的分子快速检测方法。方法根据沙门氏菌的invA基因核苷酸序列设计一对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门氏菌标准菌株的invA基因及6种非沙门氏菌株进行PCR扩增,并将扩增的片段进行克隆及序列分析。结果3种沙门氏菌标准菌株PCR均扩增出283bp的特异条带,非沙门氏菌皆无特异带扩增;DNA序列分析证实,沙门氏菌的invA基因核苷酸序列比较保守。结论本研究建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,invA基因的序列分析为进一步研究沙门氏菌不同分离株的流行病学、遗传学与分子致病机理奠定了基础。

摘要：根据国内外已公布的AIV H5N1亚型全基因组序列设计了8对引物,对H5N1亚型高致病力禽流感病毒毒株A/Duck/Guangdong/DG01/05(简称DG01)毒株进行了全基因组RT-PCR、测序及序列分析。DG01株基因组由PB22 341bp,PB1 2 341bp,PA2 233bp,HA1 779bp,NP 1 565bp,NA1 398 bp,M1 027bp,NS 875 bp 8个节段组成,与往年及同年一些流行株比较分析结果显示,DG01株具有高致病性禽流感病毒基因特征,NA基因及NS1基因均有部分缺失,从基因特点分析属于2005年流行代表株。

摘要：利用自行设计的引物 Cx和 Cs,通过 RT- PCR方法分别扩增出鸡传染性支气管炎病毒 (IBV) D4 1株、H12 0 GD株、H12 0 SH株、H5 2 GD株等 4个国产疫苗株和标准强毒 M4 1- E4株完整的 N基因 c DNA,然后将其分别克隆到p GEM T- Easy或 p MD18- T载体中并测序。测序结果表明 ,这 5个 IBV毒株的 N基因均为 12 30 bp,分别编码由 4 0 9个氨基酸残基组成的多肽。同源性分析发现 ,被检的 5株 IBV毒株可分 2组 ,其中 D4 1株、H12 0 GD株和 H12 0 SH株为一组 ,它们的核苷酸和推导氨基酸序列同源性为 99.7%～ 99.8%和 99.0 %～ 99.5 % ,而 H5 2 GD株与 M4 1- E4株构成另一组 ,其核苷酸和推导氨基酸序列同源性为 99.7%和 99.5 % ;而 2组之间的最大同源性仅为 91.0 %和 93.2 %。在系统发生进化树上 ,这 2组分别位于不同的分支簇上。值得注意的是 ,国内的 H5 2 GD株与国外报道的 H5 2株不在同一分支簇上 ,相反却与国内强毒 M4 1- E4株以及国外报道的 M4 1株在同一分支簇上。这一结果表明 ,国内的 H5 2 GD疫苗株与国外报道的 H5 2疫苗株不同 ,它们在亲缘关系上更靠近 M4 1- E4株和 M4 1株。

摘要：参照文献 ,设计和合成了 1对引物。用这对引物 ,以标准毒株DPVF3 4的DNA为模板 ,经PCR扩增出 1个特异的DNA片段。经序列测定 ,该DNA片段由 42 0bp组成。与文献报道的序列比较 ,该片段为鸭瘟病毒UL6基因DNA的一部分 ,与美国毒株LakeAndes(LA)的同源性达 99%。用该PCR方法扩增小鹅瘟病毒、细小病毒和禽巴氏杆菌 ,结果为阴性。以该PCR方法检测 6份送检病料 ,5份为阳性 ,检出率与病毒的分离一致。另外 ,该方法检测DPVDNA的敏感性达到了