摘要：目的:构建靶向小鼠TNF-α基因的RNA干扰慢病毒载体,为RNA干扰基因治疗提供基础。方法:设计、合成3组靶向TNF-α基因的特异小干扰RNA(siRNA):siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照siRNA,体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,用real-time PCR和ELISA法检测其对经脂多糖刺激的RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的影响。筛选出特异且抑制性高的siRNA,根据其序列设计合成寡核苷酸链,构建表达短发卡RNA(shRNA)的重组慢病毒质粒并测序,经鉴定质粒与包装质粒共转染293T细胞生产慢病毒颗粒,计算病毒颗粒滴度。结果:①siRNA1、siRNA2、siRNA3组的TNF-αmRNA相对表达量分别为0.24±0.01、0.16±0.02、0.19±0.01,与阴性对照0.95±0.02相比差别均具有统计学意义(F=531.3,P0.05;F=0.739,P=0.586 7>0.05)。②siRNA1、siRNA2、siRNA3的TNF-α蛋白表达分别为(23.95±1.21)、(17.27±1.46)、(19.07±1.57)ng/ml与阴性对照的(35.37±2.93)ng/ml相比,差别均具有统计学意义(F=18.1,P=0.000 6<0.001);与阴性对照相比,TNF-α蛋白表达抑制率分别为32.29%、51.16%、46.08%。③以siRNA2序列设计、合成寡核苷酸链,构建重组慢病毒穿梭质粒,其PCR产物电泳结果为343 bp,空载体PCR产物306 bp;DNA测序显示pGCSIL-GFP-shRNA测序反应中断,但已显示部分插入序列。④转染后的293T细胞,生长良好,荧光表达强,慢病毒滴度为2×106TU/μl。结论:靶向小鼠TNF-α基因RNAi慢病毒载体构建成功。

摘要：自古以来教育的一个必不可少的内容就是音乐教育。本文主要通过文献资料的阅读与研究,对现代普通本科的公修课《音乐欣赏》的教学现状进行研究,并对大学生音乐教学中存在的问题进一步的探索并提出自己的理解。