摘要：目的对中国流行的主要HIV-1毒株进行遗传特征分析，确定适用于中国HIV分子流行病学调查的gag基因扩增引物。方法从HIV序列数据库下载CRF07_BC、CRF08_BC、C亚型及M组参考毒株的gag全长序列，经序列比对后设计gag基因扩增引物；获得的基因片段采用邻接法构建系统进化树，评价不同片段用于分析和确定HIV-1亚型的可靠性，并检测部分样本以评定效果。结果目前我国常用的gag基因306／c-gag引物扩增片段（HXB2836～1507）构建的系统进化树中，CRF07_BC、C亚型进化簇的Bootstrap值分别为70％和59％，其可靠性较低，难以形成较为稳定的进化簇用于病毒亚型判断。而利用设计的gag基因GUX／GDX引物扩增片段（HXB2781～1861）构建的系统进化树中，CRF07_BC、CRF08_BC和C亚型序列能够独立成簇，其Bootstrap值分别为99％、99％和77％，具有较高的可靠性。在实际应用中，新设计的引物具有较高的扩增阳性率和测序成功率，获得序列形成B、C亚型和CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC等5个大的进化簇，其Bootstrap值均超过80％。即使仅用下游引物GDX测序获得的较短片段亦能获得较为可靠的系统进化树。结论GUX／GDX引物扩增获得的gag基因片段可以构建较为可靠的系统进化树，用于区分和判断我国流行的主要HIV-1毒株亚型，尤其是BC重组毒株和C亚型毒株。该方法在我国HIV分子流行病学调查和研究中有广泛的应用价值。

摘要：目的建立一种检测新型冠状病毒的巢式PCR方法,作为实时荧光PCR法检测新型冠状病毒的补充,并探讨该方法在临床样本检测中的初步应用价值。方法根据新型冠状病毒基因保守序列,利用在线软件设计N、S基因引物,构建巢式PCR反应体系,N基因巢式PCR及产物测序用于定性检测,S基因PCR产物测序用于型别初步鉴定。检测梯度稀释新型冠状病毒阳性样本评价检测灵敏度,检测流感病毒和人冠状病毒OC43、229E、HKU1、NL63等样本评价其特异性。分别检测Ct值>33与Ct值<33的各15份新型冠状病毒阳性样本,对扩增产物进行测序及比对分析,对检测方法进行验证。结果所建立的巢式PCR法可扩增出355 bp N基因片段及449 bp S基因片段的特异性条带,冠状病毒229E、OC43、HKU1、NL63、H3N2亚型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒阳性样本无扩增条带。N基因片段最低检测限可达Ct值37.21。30份新冠核酸阳性样本中,巢式PCR检测的N基因阳性符合一致率达100%(30/30);S基因阳性符合一致率达60%(18/30)。28份样本N基因片段测序成功,BLAST与新型冠状病毒相似性100%。12份样本S基因片段可获得位点突变特征结果。结论建立了可特异检测新型冠状病毒的巢式PCR方法,并可通过对PCR扩增产物测序分析其位点突变特征,可作为实时荧光PCR法的补充。