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人微管蛋白辅助因子A基因shRNA表达质粒的构建及鉴定: 收藏
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引用; 《临床泌尿外科杂志》2014年第6期29卷 541-543页; 作者：逄海港张鹏宋尔霖李新涛马鑫张旭解放军总医院泌尿外科北京100853; 目的:构建针对微管蛋白辅助因子A(TBCA)基因的shRNA载体并进行鉴定。方法:针对人TBCA基因mRNA序列,设计合成编码shRNA的两条寡核苷酸链,经退火形成发卡寡核苷酸模板片段,经双酶切克隆至pSilencer2.0-U6-neo和pGCsi-U6-neo-GFP载体,进行...; 目的:构建针对微管蛋白辅助因子A(TBCA)基因的shRNA载体并进行鉴定。方法:针对人TBCA基因mRNA序列,设计合成编码shRNA的两条寡核苷酸链,经退火形成发卡寡核苷酸模板片段,经双酶切克隆至pSilencer2.0-U6-neo和pGCsi-U6-neo-GFP载体,进行酶切测序鉴定,脂质体转染后进行western blot测定。结果:酶切测序证实成功构建干扰质粒,脂质体转染786-0细胞系后24小时可见绿色荧光蛋白。Western blot证实TBCA表达量降低。结论:成功构建了针对TBCA基因shRNA表达载体,为下一步进行RNAi的相关研究奠定了基础。; 来源：详细信息评论

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