摘要：为建立一种快速、灵敏、特异的定量检测啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,设计了2对引物及特异探针,体外转录制备了RNA标准品,绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。建立的定量标准曲线C t值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9988,扩增效率为95%;该方法的特异性好,与啤酒花潜隐类病毒(HLVd)、葡萄黄斑类病毒1(GYSVd-1)、葡萄黄斑类病毒2(GYSVd-2)和桃潜隐花叶类病毒(PLMVd)均无交叉反应;灵敏度为1.0×102拷贝/μL,比普通RT-PCR高10倍;试验内及试验间重复性试验的变异系数均小于3%。研究表明该方法适用于实际样品中HSVd的快速定量检测。

摘要：由葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFkV)引起的葡萄斑点病是世界上普遍发生的葡萄病毒病害。采用RT-PCR从表现明显斑点症状的葡萄样品维多利亚、无核白鸡心和胜宝叶片中检测到预期大小为179 bp的片段。对这些扩增片段进行克隆、序列测定及比对分析,结果表明,来源于这3个样品的GFkV序列间相似性为97.2%～98.9%,与NCBI已登录GFkV序列AJ309022的相似性为96.6%～97.8%。在此基础上,采用纳米磁珠法从以上3个葡萄品种的休眠枝条韧皮部与休眠芽中提取病毒RNA,根据上述已测序列设计合成了TaqMan探针与引物,初步建立了GFkV的MNP Real time-RT-PCR检测体系。结果表明,无核白鸡心中GFkV含量最高,且该病毒在休眠芽中的含量比韧皮部约高出10倍,通过MNP Real time-RT-PCR最低可从100μg葡萄组织中检测到GFkV。

摘要：本研究根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因保守序列,设计合成了1对引物,在上游引物的5′端引入T7启动子,采用RT-PCR方法获得了体外转录模板,并对转录产物RNA的浓度及OD值进行了测定。将制备的RNA标准品10倍梯度稀释后制作实时荧光定量RT-PCR标准曲线,并利用实时荧光定量RT-PCR对所获得的RNA标准品进行稳定性指标的检测。结果表明,该模板具有良好的线性关系,相关系数为0.9989。该模板稳定性好,-80℃保存30 d后无显著变化。

摘要：前期在北京地区种植的牡丹中检测到了苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV),并获得了1个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。为分析侵染牡丹的ASGV的遗传多样性,根据已报道的118个ASGV基因组全序列的保守区设计特异性引物,用重叠(overlapping)RT-PCR和cDNA末端序列快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得9个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。共计10个ASGV牡丹分离物,基因组全序列成对比对的核苷酸一致性为81.9%~97.6%,与其他物种ASGV分离物基因组全序列的核苷酸一致性为80.8%~91.2%。序列分析表明ASGV牡丹分离物的分子多样性主要位于多聚蛋白的保守结构域Mtr和P-Pro之间以及RdRp与CP之间。用127个ASGV基因组全序列进行重组分析,5个牡丹分离物被鉴定为重组体,其中1个重组体的重组亲本来源于不同国家的不同寄主植物。用79个非重组的ASGV基因组全序列构建系统发育树,表明ASGV牡丹分离物与ASGV苹果、梨和柑橘等分离物共同聚类到第Ⅰ组,且ASGV牡丹分离物聚到不同的分支。研究结果表明侵染牡丹的ASGV具有遗传多样性,重组可能是导致其遗传多样性的一个因素。

摘要：为明确引起北京怀柔玫瑰黄化、矮缩的病原,采用小RNA测序和反转录PCR对玫瑰病叶进行鉴定和分析。小RNA测序表明该病害与蚕豆萎蔫病毒2号(broad bean wilt virus 2,BBWV2)的侵染有关。根据深度测序结果,设计特异性引物对其全基因组进行克隆,序列分析表明该分离物基因组RNA1和RNA2分别为5903和3535 nt。基于RNA1和RNA2 CP基因序列的系统进化树分析表明,BBWV2-Rose RNA1与中国沈阳藜分离物BBWV2-CN:SY:Chenopodium album(MN786954)聚为一支,BBWV2-Rose RNA2与中国沈阳藜分离物BBWV2-CN:SY Chenopodium album(MN786955)聚为一支,亲缘关系最近。根据蚕豆病毒属(Fabavirus)的分类标准,该病毒是BBWV2的一个分离物。

摘要：从表现花叶症状的丁香病株上获得一病毒分离物 ,其在电镜下为约 3 0 0 nm× 1 8nm的杆状粒子 ;电泳分析表明感病组织中 ds RNA大约为 6.4kbp,而其外壳蛋白分子量约为 1 7.6k Da。以上实验结果初步将该病毒分离物鉴定为烟草花叶病毒属 ( Tobamovirus)。根据该属病毒复制酶基因序列设计通用引物 ,进行 RT-PCR检测 ,扩增出约 1 0 0 0 bp的预期特异片段( Gen Bank AY5 6670 3 )。将 PCR产物克隆后测序 ,序列分析表明 ,与从蚕豆中分离的 TMV-B株系序列 ( Gen Bank AJ0 1 1 93 3 .1 )同源性为 99.90 %。根据烟草花叶病毒 ( Tobacco mosaicvirus,TMV)的 RNA CP基因序列设计引物 ,进行 RT-PCR,扩增出约 80 0 bp的预期特异片段 ( Gen Bank AY5 6670 2 ) ,序列分析表明 ,与 TMV-B株系序列 ( Gen Bank AJ0 1 1 93 3 .1 )同源性达99% ,上述实验结果表明 ,该病毒分离物为 TMV。由于该分离物与 TMV-B在指示植物上的症状存在明显差异 ,所以 ,作者把该分离物暂命名为 TMV-S。

摘要：根据苹果果实球壳孢腐烂病菌(Sphaeropsis pyriputrescens Xiao&***)ITS区序列设计特异性引物和TaqMan荧光探针,建立了苹果果实球壳孢腐烂病菌的实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测苹果果实球壳孢腐烂病菌,供试的目标菌株检测结果为阳性,而苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、苹果干腐病菌和苹果褐腐病菌、苹果腐烂病菌等5种对照菌株检测结果为阴性。该方法具有快速、简便、准确的优点,适合于该病害的快速诊断和口岸检验检疫运用。

摘要：葡萄灰皮诺病毒(Grapevine Pinot gris virus,GPGV)最早于2012年由意大利研究人员利用高通量测序技术发现(Giampetruzzi et al.,2012),该病毒可引起葡萄叶片褪绿、斑驳、皱缩、变形等症状,导致葡萄植株发育不良、成熟期延迟、产量降低、果实腐烂,还可与其它病毒共同作用产生复合负面效应。目前,葡萄灰皮诺病毒病尚缺乏有效防治药剂,为防控该病毒病的发生和传播,本研究拟设计特异性引物和探针,建立GPGV微滴数字RT-PCR(droplet digital reverse transcription-polymerase chain reaction,ddRTPCR)检测方法,以期提高GPGV截获率,为及时防控葡萄灰皮诺病毒病的发生和蔓延提供技术支持。

摘要：根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的实时荧光RT-PCR(Real time RT-PCR)检测方法。该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增,实现PCR扩增与检测同步进行。结果表明,实时荧光RT-PCR方法检测灵敏度比普通RT-PCR高约10倍,并且具有快速、简便、准确的优点,适合于CGMMV的快速、高效检测。

摘要：大丽花潜隐类病毒（Dahlia latent viroid,DLVd）是Verhoeven et al.（2013）用Return-PAGE和s-PAGE技术从大丽花中鉴定出的一种新类病毒。根据2015年国际病毒分类委员会分类报告,DLVd为马铃薯纺锤形块茎类病毒科啤酒花矮化类病毒属成员。该病毒单独侵染时,大丽花没有明显的症状,其与马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid.