摘要：为了提供快速灵敏检测棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)的技术以防止其传播扩散,本研究根据CLCuV外壳蛋白基因(Coat protein,CP)保守序列设计了引物和TaqMan探针,并结合纳米磁珠(Magneticnanoparticles,MNPs)建立了该病毒的MNP实时荧光PCR(Real-time PCR)检测方法。该方法检测阈值约为525 fg.μL-1DNA。通过对CLCuV、非洲木薯花叶病毒、烟草线条病毒、黄瓜花叶病毒及番茄斑萎病毒的检测表明,该方法具有良好的特异性;同时该方法无需任何PCR后处理,交叉污染风险小。本方法可用于CLCuV的快速检测。

摘要：本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针，将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA，根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物，经RT—PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交，扫描仪对杂交结果扫描，GenePix Pro 4．0软件对杂交图像进行分析。结果表明，该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号，检测灵敏度比RT—PCR高10-100倍，所以，基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。

摘要：根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法。同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断。特异性和灵敏度试验结果显示,RT-LAMP方法快速、特异且灵敏,其灵敏度与普通RT-PCR法一致。

摘要：利用热分解法和表面4-羧基苯硼酸修饰,制备了用于转基因大豆提取基因组DNA的纳米粒子。制备的纳米粒子分散性好,磁响应性高。对比磁性纳米粒子和植物基因组DNA提取试剂盒提取转基因大豆基因组DNA的提取效果,结果表明,磁性纳米粒子提取转基因大豆基因组DNA的浓度明显高于试剂盒,实时荧光PCR检测转基因大豆的Ct值低于植物基因组提取试剂盒。

摘要：根据啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)各分离物基因序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对HpLVd的实时荧光RT-PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了HpLVd的实时荧光RT-PCR最佳反应条件:Mg2+终浓度为5.5 mmol/L,引物终浓度为0.7μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L。灵敏度对比试验结果显示,实时荧光RT-PCR的灵敏度较普通RT-PCR通过琼脂糖凝胶电泳高10倍,在25μL反应体系中,总RNA含量达到20 pg就能通过实时荧光RT-PCR检测出来。此方法也能成功检测田间样品上的啤酒花潜隐类病毒。

摘要：使用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在pH值7.6,蛋白用量10～15μg/mL条件下,制备形成4种葫芦科植物病毒多克隆抗体的稳定胶体金蛋白复合物;设计了双向复合试纸条,使用微定量喷头在试纸条两侧的硝酸纤维素膜上分别喷2条病毒检测线和1条质控线,组装制成免疫层析检测试纸条。结果表明经过条件优化后制备的双向复合试纸条特异性好,可在10min内同时检测4种葫芦科植物病毒,且对不同病毒阳性材料的检测灵敏度可达到稀释103倍以上。

摘要：目的建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测恶性疟原虫,为输入性恶性疟防控提供技术支持。方法根据恶性疟原虫基因组18S rRNA保守区序列,设计并合成引物和探针;构建质粒标准品,拟合标准曲线,采用纳米磁分离法提取核酸,建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测法,并进行该方法的灵敏度和特异性评价。结果与常规法（镜检法和快检法）相比,该方法检测恶性疟原虫更加灵敏,并具有良好的特异性,在（2.5×101-2.9×108）copies/ml拷贝数范围内循环阈值（Ct值）与质粒标准品拷贝数的对数值之间存在良好的线性关系（R2=0.999）;应用该方法从非洲维和部队13名归国人员中检出1例低水平恶性疟原虫感染者,而常规法（镜检法和快检法）未检出。结论该方法能够快速准确地检测恶性疟原虫,在口岸低密度恶性疟原虫感染者的检测中具有很大的应用价值。

摘要：目的建立一种登革2型病毒的快速提取和检测的方法。方法根据登革2型病毒的基因保守区,设计一套特异的实时荧光PCR的引物与探针,设计一对引物用于构建定量检测的标准品,以建立登革2型病毒实时荧光定量PCR检测方法;选用纳米磁微粒,建立纳米磁分离提取登革2型病毒RNA的方法,并对其核酸提取效果进行评估。结果纳米磁分离实时荧光PCR方法检测登革2型病毒具有快速、灵敏、特异的特点。在2.9×102~2.9×109copies/μl的范围内循环阀值（C）t值与病毒拷贝数的对数值存在线性关系（R2=0.99）。结论建立的纳米磁分离实时荧光定量PCR方法能够快速准确地检测登革2型病毒,在口岸卫生检疫中具有很好的应用价值。

摘要：根据南芥菜花叶病毒(Ar MV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条Taq MAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测Ar MV的新方法。该方法有机地结合了巢式PCR和Taq MAN探针检测技术。第二步半巢式-RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Realtime PCR等方法高。结果表明:该方法检测灵敏度可达0.06 fg/μL植物总RNA。

摘要：根据南芥菜花叶病毒不同分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计合成引物和1条TaqMan荧光探针,建立了ArMV的反转录实时荧光PCR(RT-Realtime PCR)检测方法。该方法利用TaqMan荧光探针实时监测目的基因的扩增,实现PCR扩增与探针检测同时进行,实验结果表明该方法具有"灵敏、准确、简便、快速"的特点,适合于口岸对南芥菜花叶病毒的快速检测。