摘要：目的 建立H5N6禽流感病毒TaqMan-MGB探针双重实时荧光RT-PCR,用于疑似病例快速诊断及活禽交易市场外环境监测.方法 根据GenBank中H5N6禽流感病毒HA和NA高保守序列设计特异引物和TaqMan-MGB探针,建立和优化双重实时荧光RT-PCR体系,进行特异性、灵敏度、重复性试验,并在临床应用中与商品化试剂盒比较.结果 H5N6双重实时荧光RT-PCR体系可在80 min内完成检测,与其它亚型流感病毒及常见呼吸道病原体无交叉反应,最低检测限达到10拷贝/反应,H5和N6靶基因标准曲线的相关系数R2分别为0.999和0.993,Ct值的变异系数分别为0.151％-0.549％和0.213％-0.575％,验证试验的阳性和阴性符合率均为100％.结论 H5N6禽流感病毒TaqMan-MGB探针双重实时荧光RT-PCR特异、灵敏、稳定,可在疑似病例的早期快速应急检测及活禽交易市场外环境持续性监测方面具有较好的应用价值.