摘要：目的在原核质粒中克隆金黄色葡萄球菌(***)Esx A基因,并进行表达及纯化,为其功能研究奠定基础。方法根据Gene Bank中*** Esx A序列,设计特异性引物PCR扩增Esx A基因,PCR产物纯化后经Eco RΙ和XhoΙ双酶切,连接至p ET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,His柱纯化重组Esx A蛋白,SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白的表达。结果成功克隆Esx A基因,基因全长294 bp,起始于ATG,终止于TAA,预测的分子量为11 036.2,等电点为4.61,经双酶切在294 bp处可见目的条带,基因测序显示Esx A在正确阅读框内,提示重组蛋白构建成功。SDS-PAGE显示重组蛋白在分子量大约14.5×103 Mr处左右见到可溶性的蛋白表达,Western blot分析识别14.5×103 Mr重组蛋白。结论在大肠杆菌中成功克隆表达Esx A蛋白,为其功能研究奠定基础。

摘要：目的了解广州地区儿童分离株青霉素耐药肺炎链球菌(PNSP)的分子流行病学,为肺炎链球菌感染性疾病防控提供实验依据。方法设计特异性引物,PCR扩增PNSP青霉素结合蛋白基因PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X、PBP3,进行测序分析。并使用Hinf I对PCR产物进行酶切,分析其限制性片段性长度多态性(RFLP)。结果成功提取PNSP的DNA、PCR结果显示:50株耐青霉素肺炎链球菌中:含PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X及PBP3的菌株阳性率分别为48.9%、64.4%、71.1%、31.1%、40.0%、31.1%。测序显示,它们与GenBank已知序列的同源性分别为99%、98%、100%、97%、95%、100%。使用Hinf I的RFLP分析显示:PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP3仅有一种基因型;PBP2B、PBP2X有两种基因型的,阳性率分别为71.4%、28.6%、66.7%、33.3%。结论广州肺炎链球菌儿童分离株耐青霉素基因的分布以PBP2A、PBP1B、PBP1A为主。使用Hinf I酶切,PBP2B、PBP2X具有两种基因型,其中优势型均大于65%。