摘要：为建立用于检测临床粪便样品中胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,***)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究参考GenBank中发表的*** PHE/MN1-00株基因组序列设计50对引物,通过SYBR GreenⅠ荧光染料法PCR验证引物的特异性,针对扩增效率最好的特异性上、下游引物合成相应的TaqMan探针,优化反应条件,对其线性范围、敏感性和重复性进行验证,系统的完成了该方法的建立。结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR方法,特异性强;在靶标核酸为2.95×10^(1)~2.95×10^(6)拷贝/μL区间线性关系良好,相关系数R^(2)=0.9981,扩增效率为96.51%;最低检测浓度为5拷贝/μL;批间和批内的CV均小于2%,重复性好。使用普通PCR方法与本方法对2020年10月至2021年2月采自江西地区猪场的373份粪便样品进行检测,***的总检出率分别为21.4%(80/373)和27.6%(103/373),显示本方法具有更高的敏感性,其检测场阳性率为88.9%(8/9),各阶段生产猪群阳性率分别为经产母猪28.7%、保育仔猪36.4%和育肥猪14.3%。该检测结果为江西地区的***的流行情况提供参考。

摘要：根据已发表的猪圆环病毒2型（PCV-2）的全基因组序列,设计1对特异性引物,进行PCR扩增,将1个扩增产物连接到pUCm-T vector上并克隆到大肠杆菌DH5α中,得到1个阳性克隆,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定,证明扩增出了PCV-2目的片段。结果表明本实验分离株（JXPCV-2）与国内外不同地域的PCV-2全基因组序列的差异很小,同源性在94.2%～99.7%;进化树分析表明JXPCV-2与其他10株PCV-2分离株的亲缘关系较近,与浙江分离株（AY691169）亲缘关系最近。

摘要：根据GenBank中登录的猪嵴病毒3 D基因保守序列,设计合成1对引物,以腹泻哺乳仔猪的小肠为起始材料,建立了猪峭病毒的RT-PCR检测方法,并用该方法对收集的50份哺乳仔猪腹泻样本进行检测。结果显示,该方法对模板的最小检测量是2.3pg,检测猪其他常见致腹泻病毒均为阴性,同一样品3次试验结果一致;所扩增的序列经测序分析均为猪嵴病毒的3D核苷酸序列;仔猪腹泻样本的猪嵴病毒检出率达58%。结果表明,该方法敏感度高、重复性和特异性良好,可用于猪嵴病毒的分子流行病学调查和临床病例的快速诊断。

摘要：根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌、鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。PCR产物经EcoRI酶切鉴定得494bp和177bp两个预期条带。最低检出基因组DNA浓度为800fg。用全菌体进行PCR时,本实验室分离鉴定的60株RA均能够扩增出特异性目的条带。25份临床疑似病例的分离菌株的PCR扩增阳性率与生化鉴定率完全一致。该方法表明能从病料组织培养8h的混合菌群中快速、准确地检测到RA,可用于RA的快速诊断和流行病学调查。

摘要：建立猪戊型肝炎病毒(Swine Hepatitis E Virus,SHEV)RT-PCR检测方法,为SHEV的流行病学调查、临床诊断提供可靠的技术手段。根据SHEV的基因组序列,设计并合成2对引物,以SHEV江西分离株SHEV-JX-1为模板,对反应条件进行了优化,建立了诊断SHEV的RT-PCR方法。该方法可从SHEV-JX-1中扩增出230 bp的片段,测序结果表明为SHEVⅣ型基因片段;对猪的其它病毒进行检测结果均为阴性;能检测出2.5×10-8μg的SHEV RNA;对江西部分猪场采集的胆汁及肠容物进行检测,结果胆汁中的阳性率为10%,肠容物的阳性率为4%。实验建立的RT-PCR方法具有敏感、特异、重复性好的特点,可用于SHEV的分子流行病学调查和临床快速诊断。

摘要：参考GenBank已发表的PCV-2基因序列,根据PCV-2(AF027217)和PCV-1(U49186)全基因序列设计合成一对引物,进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳,呈现一条大小约1 154 bp的特异条带,经条件优化,建立了猪病料中PCV-2感染的PCR检测方法。采用建立的PCR方法对江西各地猪场133份猪的病料进行PCV-2检测,结果表明,受检猪的组织及血清样品中PCV-2的总检出率为53.38%,证实江西各地猪场存在PCV-2感染。

摘要：建立猪痘病毒(swinepox virus,SWPV)的PCR检测方法,为SWPV的流行病学调查和临床诊断提供可靠技术支撑。参考GenBank登录的SWPV(AF410153.1)基因组序列,设计合成1对引物,扩增目的片段为975 bp。以SWPV江西分离株SWPV-JX01为模板,对反应条件进行优化,建立了SWPV的PCR诊断方法。特异性、敏感性和重复性试验表明,该方法对临床上常见的其它猪病毒检测结果均为阴性;对模板的最低检测量为2.7 pg;具有良好的重复性。用此方法检测50份疑似猪痘的临床样品,其中阳性率为80.2%。该方法敏感度高,重复性和特异性良好,可用于猪痘病毒的分子流行病学调查和临床病例的诊断。

摘要：为建立猪痘病毒(SWPV)血清学检测方法,根据SWPV的P35基因设计1对引物,从SWPV江西分离株(JX01)的细胞培养物中扩增到975bp的P35基因。将P35基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,将其进行原核表达,经SDS-PAGE分析,表达P35重组蛋白约64 000。采用MagneGST蛋白纯化试剂盒纯化P35重组蛋白,以纯化的重组蛋白为检测抗原,建立了SWPV抗体间接ELISA检测方法,间接ELISA条件为:P35重组蛋白包被质量浓度为10mg/L,被检猪血清的稀释倍数为1∶80。以建立的间接ELISA方法对江西省47个猪场的471份猪血清进行了SWPV抗体的检测,结果猪血清抗体阳性率为35.7%,表明江西省部分猪场存在较普遍的SWPV感染。

摘要：为确定江西某猪场部分母猪陆续发生皮肤痘斑的病原,根据猪痘病毒(AF410153.1)基因序列设计1对引物,采用PCR方法从发病母猪皮肤痘痂中扩增到猪痘病毒P35基因,与猪痘病毒参考毒株(AF410153.1)P35基因的核苷酸同源性为98%,说明该场母猪皮肤出现的痘斑是由猪痘病毒引起。利用PK15细胞从皮肤痘痂中分离到1株猪痘病毒,该毒株能在PK15细胞中连续传代,不产生严重的细胞病变(CPE)。采用间接ELISA方法对该场的10头母猪和8头肥猪血样进行猪痘病毒抗体检测,母猪和肥猪血清中猪痘病毒抗体阳性数分别为5头和4头,阳性率为50%。

摘要：通过鸡胚接种和鸡胚成纤维单层细胞培养相结合的方法从江西省某猪场死亡仔猪的脑、肺脏中分离到一株病毒。该病毒接种家兔48h后开始表现不安，呈奇痒为特征的神经症状并死亡。病毒能在鸡胚绒毛尿囊膜上形成痘斑，在鸡胚成纤维细胞中增殖并使细胞出现病变、死亡。电镜观察到病毒粒子呈圆形，囊膜清晰可见，直径130—170nm。根据已发表的伪狂犬病病毒（PRV）gE基因的序列，设计并合成了一对引物，采用PCR方法可扩增特异性953pb DNA片段。证实分离的病毒株为伪狂犬病病毒，命名为伪狂犬病病毒GN0605株。