摘要：针对天府广场目前存在的交通问题,结合成都市交通发展的实际情况,规划根据天府广场的功能定位,以绿色交通及一体化交通为理念,提出合理的交通政策,减少交通出行数量、规模;以公交优先为原则,建立方便、快捷的地铁、公交、步行换乘系统;建立完善、高效的交通管理系统;为步行者建构良好、舒适的空间;限制机动车的大量驶入,分流过境机动车流量;严格限制机动车停车泊位,加强停车管理。

摘要：为寻找脑内新基因 ,以正常成人全脑cDNA为模板 ,采用锚定PCR方法进行扩增 ,将经琼脂糖DNA电泳鉴定获得的一约 12 0 0bp大小的特异性条带回收 ,并克隆入Teasy载体 .用 310GeneticAnalyzer进行自动测序 .所得序列进行生物信息学分析 :BLAST相似性分析结果证明所得序列为新序列 ,读框分析表明 ,该序列中存在一完整编码区 ,编码含 35 7个氨基酸的蛋白质 .ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白 (ACP)样结构域 .随后 ,经 3′RACE法克隆到该基因的全长cDNA ,其全长为 2 0 2 4bp ,染色体定位在 14q11 2 ,含有 16个外显子 ,15个内含子 ,该基因已登录到GenBank .经设计编码区引物 ,从Teasy载体扩增出编码区后再克隆入pGEX 4T1表达载体 ,经异丙基硫代 D 乳糖苷 (IPTG)化学诱导表达 .其编码区克隆入 pGEX 4T1表达载体后 ,转入JM10 9宿主菌 ,经IPTG诱导已得到表达 .点杂交及RNA印迹表明 ,该基因在正常成人脑内广泛高表达 .

摘要：目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。

摘要：根据已知的PTKs的氨基酸序列保守区设计简并引物 ,采用 3′快速末端扩增法 (3′RACE)扩增了滑膜细胞中PTKscDNAs的 3′末端 ,然后通过RNA点杂交方法分别观察了这些PTKs在类风湿性关节炎 (RA)和骨性关节炎 (OA)病人滑膜细胞中的表达水平。结果从RAFLS细胞中共克隆到 6种已知PTKscDNA片段 ,分别为血小板衍生生长因子受体A (PDGFRA)、胰岛素样生长因子 1受体 (IGF 1R)、含盘状 (discoidin)结构域的受体型酪氨酸激酶 (DDR2 )、Lyn、Janus激酶 1(JAK1)和TYK2。RNA点杂交结果显示 ,在 4例RA病人和 2例OA病人的滑膜细胞中都表现为 :PDGFRA、IGF 1R和DDR2在RA滑膜细胞中的表达水平高于OA滑膜细胞 ,其它几种激酶在两种细胞中的表达水平无明显差别 ,说明RA滑膜细胞中至少表达PDGFR、IGF 1R、Lyn、DDR2、JAK1和TYK2等 6种PTKs,其中PDGFRA、IGF 1R和DDR2可能与RA滑膜细胞的过度增殖和对软骨的侵蚀性相关。

摘要：目的探讨源于N-myc下游调节基因2(NDRG2)蛋白的截短肽对胶质瘤细胞系U87MG和U251的抗肿瘤作用。方法设计、构建人类NDRG2蛋白若干截短肽片段的真核表达载体,转染至上述两种肿瘤细胞中,通过流式细胞术(FCM)观察肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞情况。结果流式细胞术结果显示,包含NDRG2蛋白C末端的片段均能不同程度的诱导两种肿瘤细胞系的周期阻滞。结论 NDRG2的C末端是其抗肿瘤作用的关键,很有可能从中筛选出具有治疗意义的抗肿瘤肽。

摘要：目的研究表观遗传药物组蛋白去乙酰化抑制剂曲古霉素A(TSA)对miR-34家族(miR-34a/b/c)在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制。方法在肝癌细胞系中分别转染miR-34模拟物或相应阴性对照,用real-time PCR法检测miR-34a/b/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中分别转染miR-34b模拟物、相应阴性对照,或用TSA、DMSO处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34b及TSA对肝癌细胞Hep G2、PLC/PRF/5糖酵解途径的影响;设计拯救实验在Hep G2细胞中研究TSA、miR-34b与肝癌细胞糖酵解调控的关系。结果 TSA可以诱导Hep G2、PLC/PRF/5肝癌细胞内源性miR-34b的表达上调(P<0.01);过表达miR-34b可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P<0.05);miR-34 b可以抑制含有LDH-A 3'非翻译区的报告基因活性;敲低miR-34 b的表达可以降低TSA对肝癌细胞Hep G2糖酵解途径的抑制作用。结论 TSA通过诱导miR-34 b表达上调发挥抑制肝癌细胞的代谢转换。

摘要：目的研究去甲基化药物5-AZA对miR-34a和miR-34c在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制。方法用real-time PCR法检测肝癌细胞系中miR-34a/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中过表达miR-34a、miR-34c或用5-AZA处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34a/c及5-AZA对肝癌细胞BEL7402糖酵解的影响;设计拯救实验研究5-AZA、miR-34a/c与肝癌细胞糖酵解调控的关系。结果 5-AZA可以诱导BEL7402肝癌细胞内源性miR-34a、miR-34c的表达上调(P<0.01);过表达miR-34a/c可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P<0.05);LDH-A是miR-34a/c的潜在靶基因;敲低miR-34a/c的表达可以降低5-AZA对肝癌细胞BEL7302糖酵解途径的抑制作用。结论 5-AZA通过诱导miR-34a/c表达上调,发挥抑制肝癌细胞代谢方式转换的功能。

摘要：目的构建两种人NDRG2亚型原核重组体pPROEX-HTb-NDRG2并进行表达、纯化、浓缩和鉴定。方法根据人NDRG2基因序列设计合成特异引物,聚合酶链反应(PCR)扩增,亚克隆入6×His融合表达载体pPROEX-HTb,在大肠杆菌BL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,并用Protino Ni-TED Resin进行纯化。结果构建的重组质粒经酶切后分别可见约1100bp大小的片段,与预期结果一致,基因测序结果表明序列正确。在IPTG的诱导下重组体分别表达出分子量约45kD的表达产物,Western blot结果证实重组6×His融合蛋白可与抗-NDRG2蛋白抗体发生特异性反应;并通过Protino Ni-TED Resin成功获得了纯化蛋白。结论两种人NDRG2亚型基因分别被亚克隆至6×His融合表达载体pPROEX-HTb中,并获得成功表达和纯化,为该蛋白的生物活性及抑瘤作用的研究奠定了基础。

摘要：目的研究化疗药5-氟尿嘧啶和顺铂对miR-449b在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞迁移能力的分子机制。方法收集肝癌患者的组织样本,提取总RNA,用real-time PCR法检测肝癌组织样本中miR-449b的表达;5-氟尿嘧啶和顺铂处理肝癌细胞,检测miR-449b的表达;在肝癌细胞中过表达miR-449b或用5-氟尿嘧啶和顺铂分别处理肝癌细胞,利用细胞划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力变化;设计拯救实验,探究化疗药5-氟尿嘧啶和顺铂通过诱导miR-449b表达,参与肝癌细胞迁移能力调控;软件预测结合Western blot实验,鉴定miR-449b的功能靶基因。结果 miR-449b在肝癌患者组织中表达下调(P<0.001);5-氟尿嘧啶和顺铂诱导肝癌细胞内源性miR-449b的表达上调(P<0.001);过表达miR-449b可以抑制肝癌细胞的迁移(P<0.001);敲低miR-449b的表达可以抑制5-氟尿嘧啶和顺铂对肝癌细胞迁移能力的抑制作用(P<0.05);catenin-δ是miR-449b的直接靶基因。结论5-氟尿嘧啶和顺铂通过诱导miR-449b的表达抑制肝癌细胞的迁移。

摘要：目的了解北京市通州区大学生人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)疫苗接种意愿及其影响因素,为大学生HPV健康教育、疫苗应用与推广提供参考依据。方法本研究采用多阶段分层整群随机抽样,抽取2020年9—12月通州区1760名在校大学生为调查对象,应用自行设计问卷对HPV感染和疫苗认知情况、性行为、HPV接种意愿进行调查,探索影响大学生HPV疫苗接种意愿的影响因素。结果本研究发放调查问卷1930份,有效问卷1760份,有效回收率91.19%。1760名大学生中,接种HPV疫苗24名,调查接种率2.91%,1736名未接种者中表示愿意接种HPV疫苗777人(44.76%)。多因素logistic回归分析显示,知道HPV疫苗已上市(OR=1.75,95%CI:1.39~2.20)、HPV及其疫苗认知程度好(OR=1.31,95%CI:1.03~1.68)、对免疫规划政策信赖程度高(OR=0.08,95%CI:0.06~0.11)、学校或居住地与预防接种门诊距离近(OR=0.72,95%CI:0.60~0.96)的大学生HPV疫苗接种意愿高(P<0.05)。结论北京市通州区大学生主动接种HPV疫苗的意愿不强。加强HPV相关知识健康教育,提升预防接种服务可及性有助于提高大学生HPV疫苗接种意愿,并促进宫颈癌及HPV所致疾病的预防与控制。